4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ И САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Методика. Министерство здравоохранения РФ. 03.03.04 МУК 4.2.1884-04

3.5.3. Ход исследования на ооцисты криптоспоридий

     После  проведения фильтрации через АТМ с диаметром пор 2,5 мкм на
приборе  типа ПВФ-35 или ПВФ-47 полученного концентрированного 1 смыва
мембрану(ы) тщательно высушивают в лотке на воздухе.
     Затем  окрашивают  АТМ  в  кювете (лотке, чашке Петри) карболовым
фуксином (краска по Циль-Нильсену) в течение 20 мин.
     После    окраски   фильтры   промывают   под   проточной   водой,
предварительно  закрепив  АТМ  за  край  химического  стакана, с таким
расчетом,  чтобы  струя  воды  не  попадала на поверхность мембраны, а
закрепленный фильтр свободно плавал в воде. Фильтр считается промытым,
когда из стакана польется прозрачная вода.
     Затем  обесцвечивают (дифференцируют) 5 - 10%-ной серной кислотой
в   течение  10  -  20  с  и  снова  промывают  под  проточной  водой,
предварительно  закрепив  АТМ  за  край  химического  стакана, с таким
расчетом,  чтобы  струя  воды  не  попадала на поверхность мембраны, а
закрепленный фильтр свободно плавал в воде. Фильтр считается промытым,
когда из стакана польется прозрачная вода.
     Затем   дополнительно   окрашивают   0,2%-ным   водным  раствором
метиленового  синего или 5% малахитовой зелени в 10% этиловом спирте в
течение  3  - 5 мин. (при отсутствии этих ингредиентов этот этап можно
исключить).   Промывают  под  струей  проточной  воды,  предварительно
закрепив  АТМ  за  край  химического  стакана, с таким расчетом, чтобы
струя  воды не попадала на поверхность мембраны, а закрепленный фильтр
свободно  плавал  в  воде. Фильтр считается промытым, когда из стакана
польется прозрачная вода.
     Пинцетом  фильтр из воды переносят в кювет (лоток, чашку Петри) и
тщательно высушивают на воздухе.
     Окрашенный   фильтр   (АТМ)   помещают   на   предметное  стекло,
предварительно  смазанное  иммерсионным  маслом  (для лучшей адгезии),
накрывают   покровным  стеклом  и  микроскопируют  под  иммерсией  при
увеличении микроскопа: окуляр 10х, объектив 90х или 100х.
     Результат окрашивания.
     Ооцисты    криптоспоридий    окрашиваются    в   разные   оттенки
ярко-красного  (малинового,  вишневого)  цвета  и  имеют  вид округлых
образований  диаметром  5  -  6 микрон с отчетливо видимой оболочкой и
структурированным    содержанием    (можно    наблюдать    наличие   4
веретенообразных  темноокрашенных  спорозоитов)  на  синем или зеленом
основном фоне.
     Примечание.   Для  определения  в  воде  цист  лямблий  и  ооцист
криптоспоридий  при  наличии в лабораториях специального оборудования,
иммунореагентов,    химреактивов    может   быть   использован   метод
иммуномагнитной сепарации с флуорохромами.