Фрагмент документа "МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ РЫБОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ВОДОЕМОВ".
РЕЦЕПТЫ ОСНОВНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И РЕАКТИВОВ
ДЛЯ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
1. Глюкозопептонная среда (ГПС)
Среду готовят двух видов: нормальную и концентрированную.
Среда нормальной концентрации содержит:
Пептона 10 г
Натрия хлористого 5 г
Глюкозы 5 г
Воды дистиллированной 1000 мл.
После растворения указанных ингредиентов добавляют индикатор (2
мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего или 10 мл
индикатора Андраде), устанавливают рН, который должен быть в пределах
7,4 - 7,6, и разливают среду в пробирки по 5 или 10 мл с поплавками
или комочками ваты, стерилизуют при 112 град.С (0,5 кгс/кв. см) в
течение 12 мин.
При приготовлении концентрированной среды количество всех
ингредиентов, кроме воды, увеличивают в 10 раз.
2. Среда ВНИИВС
Пептона 10 г
Натрия хлористого 5 г
Лактозы 4 г
Воды дистиллированной 1000 мл
Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания
определяют рН, который должен быть в пределах 7,6 - 7,8. После этого
добавляют индикаторы: 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой
кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини.
Цвет готовой среды сиреневато-малиновый. Среду разливают в
пробирки по 5 - 10 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. или в
аппарате Коха - дважды по 20 мин. или путем трехкратного кипячения по
5 мин. с интервалом 30 мин.
Среда для индикации аэромонад:
1. Среда Эндо с молоком
К готовой среде Эндо, приготовленной по прописи на этикетке
флаконов, добавляют 10% стерильного обезжиренного молока.
2. Среда А-1 (жидкая среда накопления)
Воды дистиллированной 100,0 мл
Сульфата магния 0,02 г
К НРО 0,1 г
2 4
Натрия хлористого 0,5 г
Желатина 1,0 г
Крахмала растворимого 0,2 г
Стерилизация при 0,5 атм. 15 мин.
После стерилизации добавляют 2,0 мл 0,01%-ного водного раствора
кристаллического фиолетового, рН 7,2 - 7,4. При посевах больших
объемов применяют концентрированную среду, в которой все ингредиенты,
кроме воды, увеличены в 10 раз и которую прибавляют в исследуемый
объект в соотношении 1:10.
3. Среда А-2 (плотная дифференциально-элективная)
Воды дистиллированной 100 мл
Агар-агара 2,0
Сульфата магния 0,02 г
К НРО 0,1 г
2 4
Крахмала растворимого 0,5 г
Желатина 5,0 г
Стерилизация при 0,5 атм. в течение 15 мин. После этого добавляют
2,0 мл 10%-ного водного раствора трифенилтетразолхлорида, рН 7,4 -
7,6. Среду после остывания приблизительно до 45 град.С разливают в
чашки Петри.
Среды для индикации псевдомонад
1. К готовой среде А-2 (плотная дифференциально-элективная для
индикации аэромонад) добавляют 40000 ед. пенициллина.
2. Среда с трифенилтетразолхлоридом (ТТХ)
Пептона 2,0 г
Дрожжевого экстракта (по Г.К. Калине) 15 мл
или сухих дрожжей 0,3 г
Двузамещенного фосфата калия 0,2 г
ТТХ 0,8 г
Воды дистиллированной до 100,0 мл
Стерилизация при 0,5 атм. 15 мин., рН 7,1.
8%-ный водный раствор ТТХ в дистиллированной воде прибавляют в
среду в соотношении 1:10.
3. Селективно-дифференциальная среда "блеск"
Мясопептонного агара 2% (стерильного) 100,0
Молока нормализованного 10,0 мл
10%-ного водного раствора ТТХ 8,0 мл
аргинина гидрохлорида 0,3 г
В расплавленный МПА прибавляют аргинин, раствор ТТХ и стерильное
обезжиренное молоко. Все размешивают, затем разливают в чашки Петри.
4. Среда Кинг-А
Пептона 2,0 г
Агара 1,5 г
Глицерина 1,0 мл
Сульфата калия 1,0 г
Хлорида магния 0,14 г
Воды дистиллированной до 100,0 мл
рН 7,2. Стерилизация при 0,5 атм. 15 мин. Разливают в чашки
Петри.
5. Среда для определения теста Хью-Лейфсона
(оксидация, ферментация)
Модификация в одной пробирке.
Пептона 2,0 г
Хлорида натрия 5,0 г
К НРО 0,3 г
2 4
Агара 4,0 - 6,0 г
1,6% раствора фенолового красного 2,5 мл
Воды дистиллированной 1000,0 мл
После растворения ингредиентов в водяной бане или автоклаве
разливают в пробирки ровно высотой столбика 6 см (независимо от
диаметра пробирки), стерилизуют при 0,5 атм. 15 мин., застуживают
столбиком.
6. Реакция цитохромоксидазы по Гэби и Хедли
Принят метод определения цитохромоксидазы с использованием
диметилпарафенилендиамина, который в сочетании с альфа-нафтолом
образует за счет оксидации цитохрома индофеноловый синий. 1%-ный
раствор указанного реактива смешивают с 1%-ным спиртовым раствором
альфа-нафтола в пропорции 2:1 непосредственно перед применением.
Хранение обоих реактивов обязательно раздельно в холодильнике. Смесь
реактивов наносят петлей на периферический участок макроколонии на
среде Кинг-А или изолированную колонию на среде "блеск".
Пигментированные колонии на среде Кинг-А и покрытые золотистым налетом
на среде "блеск" предпочтительно наносить на фильтровальную бумагу,
смоченную смесью реактивов. Положительный результат - посинение
колонии или мазка на фильтровальной бумаге в течение 20 - 40 секунд.
Позднюю реакцию не учитывают.
|
Фрагмент документа "МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ РЫБОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ВОДОЕМОВ".