МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. Рекомендации. Главный государственный санитарный врач РФ. 24.12.04 ФЦ/4022

Подготовка фильтровального аппарата

     Воронку  и  столик  фильтровального  аппарата  обтирают  марлевым
(ватным)  тампоном,  смоченным  спиртом ректификованным, и фламбируют.
После   охлаждения   на   столик   фильтровального   аппарата   кладут
фламбированным  пинцетом  стерильный  мембранный фильтр, прижимают его
воронкой.
     В  воронку  прибора  для  фильтрования наливают отмеренный объем,
затем создают вакуум.
     При  посеве  нескольких  объемов  одной пробы следует фильтровать
через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие,
а  затем большие объемы, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием
каждой новой пробы прибор обеззараживают.
     Следует начинать с фильтрования проб, которые предположительно не
загрязнены,  а  затем  фильтровать загрязненные пробы. После окончания
фильтрования  и  осушения  фильтра  отключают вакуум, воронку снимают,
фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят
его,  не  переворачивая,  на  питательную  среду  Эндо  с  добавлением
розоловой   кислоты,   разлитую  в  стерильные  чашки  Петри,  избегая
пузырьков  воздуха  между  средой  и  фильтром. Эта среда используется
только при работе методом мембранной фильтрации. Поверхность фильтра с
осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
     Под  каждым  фильтром  на  дне  чашки  делают надпись с указанием
объема  профильтрованной  пробы,  номера  и даты посева. На одну чашку
можно   поместить   3  -  4  фильтра  с  условием,  чтобы  фильтры  не
соприкасались.
     Чашки  с  фильтрами  ставят  в  термостат дном вверх и инкубируют
посевы при температуре (37 +/- 1) град.C в течение (24 +/- 2) ч.
     Если  на  фильтрах  нет  роста  или  выросли  колонии  пленчатые,
губчатые,  плесневые,  прозрачные,  расплывчатые, выдают отрицательный
ответ: отсутствие БГКП в исследуемой почве.
     Анализ заканчивают через 24 ч.
     Если   на   фильтрах   обнаружен   рост   изолированных  типичных
лактозоположительных  колоний:  темно-красных, красных с металлическим
блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на
обратной  стороне  фильтра,  подсчитывают  число  колоний каждого типа
отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к БГКП.
     Для подтверждения наличия БГКП исследуют:
     - все колонии, если на фильтрах выросло менее 5 колоний;
     - не менее 3 - 4 колоний каждого типа.
     Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на:
     - наличие оксидазной активности;
     - принадлежность   к  Граму  (микроскопия  окрашенного  по  Граму
препарата или постановка теста Грегерсена);
     - ферментацию лактозы до кислоты и газа.
     Для  расчета индекса количества бактерий группы кишечных палочек,
выросших  в  анализируемом  объеме  почвы, умножают на 1000 и делят на
этот объем.