МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. Рекомендации. Главный государственный санитарный врач РФ. 24.12.04 ФЦ/4022

Посев почвенных разведений в среде Вильсон-Блера

                                                      6
     Из  приготовленных почвенных  разведений (до 1:10 ),    прогретых
при температуре (75 +/- 5) град.C в течение 20  минут  для  исключения
вегетативных форм,  по 1,0 куб. см переносится в два параллельных ряда
пробирок.  Затем во все пробирки наливают по 9 - 10 куб.  см  горячего
железосульфитного агара, приготовленного ex tempore и прогретого до 70
- 80 град.C (среду заливают по стенке  пробирки,  избегая  образования
пузырьков).  Для  создания  анаэробных  условий  роста пробирки быстро
охлаждают,  помещая в емкости с холодной водой.  Посевы инкубируют при
(44  +/-  1) град.C в течение 16 - 18 часов.  При росте в среде черных
крупных  колоний  (грамположительные,  каталазоотрицательные)   выдают
положительный ответ о присутствии С. perfringens в 1 г почвы.
     Определение методом фильтрования в пробирках
     Перед  посевом  пробирки с железосульфитным агаром расплавляют на
водяной  бане  (не  кипятить!).  В  течение  посева поддерживают среду
нагретой до (70 - 80) град.C в водяной бане.
     После   фильтрования   установленного  объема  мембранный  фильтр
фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутый в
виде  трубочки помещают в пробирку с горячим агаром. Сторона фильтра с
осевшими  бактериями  обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и
располагается по стенке пробирки.
     Сразу  же  после посева пробирку с агаром и фильтром для создания
анаэробных  условий  быстро  охлаждают,  помещая  в емкость с холодной
водой. Культивируют посевы при (44 +/- 1) град.C в течение (16 - 18) ч.
     Определение методом фильтрования в чашках Петри
     Чашки Петри  заливают  тонким слоем железосульфитного агара 4,0 -
5,0 куб. см. После фильтрации фильтр помещают фильтрующей поверхностью
вниз  на  застывшую питательную среду так,  чтобы под фильтром не было
пузырьков  воздуха.  Затем  заливают  расплавленным   железосульфитным
агаром  до верхнего края чашки,  чтобы крышка плотно прилегала к среде
для создания анаэробных условий.  Культивируют посевы при (44  +/-  1)
град.C в течение (16 - 18) ч.
     Подсчитывают  черные  колонии,  выросшие как на фильтрах, так и в
толще  питательной среды. При отсутствии роста на всех фильтрах - дают
отрицательный ответ.