Фрагмент документа "ЭКСПЕРТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ <1>".
4. Исследование методом жидкостной хроматографии
Исследование методом жидкостной хроматографии применяют как для
качественного выявления производных амфетамина, так и для их
количественного определения в экспертных образцах.
Анализ проводят на жидкостном хроматографе "Милихром-4" (или
аналогичных жидкостных хроматографах), используя для разделения
компонентов один из вариантов высокоэффективной жидкостной
хроматографии - обращенно-фазную распределительную хроматографию.
Условия анализа: колонка типа КАХ-4 размером 80 х 2 мм с
обращенно-фазным сорбентом "Separon С 18" (НПО "Научприбор", г. Орел);
подвижная фаза - фосфатный буфер: ацетонитрил (80:20); изократическое
элюирование со скоростью 120 мкл/мин.; спектрофотометрический
детектор, работающий в режиме одновременного пятиволнового
детектирования на длинах волн 210, 220, 230, 250, 280 нм; объем
вводимой пробы - 10 мкл; максимальная длительность проведения анализа
- 20 мин.
Для приготовления фосфатного буфера в 1 л дистиллированной воды
растворяют 3,0 г КОН, 12,0 г 82% ортофосфорной кислоты и 3,0 г
диэтиламина. Буфер указанного состава должен иметь значение pH3. В
случае отклонения pH буфера от указанной величины следует провести
корректировку, добавляя водный раствор щелочи или кислоту. Значение pH
буфера предварительно определяют по универсальной индикаторной бумаге.
Для более точного определения следует использовать pH-метр любого
типа.
Для приготовления подвижной фазы фосфатный буфер смешивают с
ацетонитрилом в указанном соотношении и тщательно перемешивают с
помощью магнитной мешалки. Подвижную фазу фильтруют через мембранный
фильтр и дегазируют, помещая в ультразвуковую баню на 20 мин., или
продувают гелием в течение 20 мин. (дегазация гелием более
эффективна).
Для определения хроматографических параметров разделения
производных амфетамина готовят тестовую модельную смесь индивидуальных
веществ. Для приготовления модельной смеси навески индивидуальных
веществ помещают в мерную колбу и растворяют в подвижной фазе с таким
расчетом, чтобы концентрация каждого компонента в растворе не
превышала 0,1 мг/мл. Раствор тщательно перемешивают в ультразвуковой
бане, фильтруют, дегазируют, продувают гелием в течение 20 мин. и
хроматографируют в указанных условиях.
На рис. 1 представлена хроматограмма модельной смеси четырех
индивидуальных веществ - МДА, МДМА, МДЕА и МБДБ. Полученное при этом
разрешение хроматографических пиков позволяет проводить количественное
определение компонентов смеси. По имеющимся данным, образцы
аналогичного качественного состава наиболее часто представлены среди
реальных объектов экспертного исследования.
Рис. 1. Хроматограмма модельной смеси четырех производных
амфетамина, полученная в режиме пятиволнового
детектирования спектрофотометра "Милихром-4"
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Хроматографические параметры разделения некоторых производных
амфетамина для указанных условий приведены в табл. 7.
Таблица 7
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ РАЗДЕЛЕНИЯ
ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА
------------------------------------------------------------------
|Анализируемый| Абсолютное время |Исправленное время |Коэффициент|
| амфетамин | удержания, мин. | удержания, мин. | емкости |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|Мескалин |2,92 |1,22 |0,72 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ТМА |3,61 |1,91 |1,12 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|БДБ |3,75 |2,05 |1,20 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|МДА |3,90 |2,20 |1,29 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ПМА |4,09 |2,39 |1,40 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|МДМА |4,10 |2,40 |1,41 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|МДЕА |5,40 |3,70 |2,18 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ДМА |5,48 |3,78 |2,22 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|МБДБ |6,04 |4,34 |2,55 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ДОМ |12,09 |10,39 |6,11 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ДОХ |12,50 |10,80 |6,35 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ДОБ |15,00 |13,30 |7,82 |
|-------------|------------------|-------------------|-----------|
|ДОЭТ |15,76 |14,06 |8,27 |
------------------------------------------------------------------
Все представленные хроматограммы и УФ-спектры получены с помощью
программно-аппаратурного комплекса МультиХромСпектр, разработанного АО
"Амперсенд" (г. Москва). При отсутствии данного комплекса снятие
УФ-спектров компонентов хроматограмм проводят в процессе анализа в
автоматическом режиме работы хроматографа "Милихром-4" при внесении
соответствующих изменений в программу работы спектрофотометрического
детектора.
Для проведения количественного определения производных амфетамина
калибруют УФ-детектор, применяя для этого растворы индивидуальных
веществ с точно известной концентрацией (метод абсолютной калибровки).
Для приготовления калибровочных растворов готовят растворы
индивидуальных веществ в подвижной фазе с точной концентрацией - 1,0
мг/мл. Далее растворы последовательно разбавляют подвижной фазой для
получения растворов с концентрациями 0,5; 0,25; 0,125; 0,0625; 0,0312
и 0,0156 мг/мл. Приготовленные растворы хроматографируют при
неизменных условиях. По результатам анализа строят калибровочные
графики, определяющие зависимость площади хроматографического пика
вещества (при детектировании сигнала на строго заданной длине волны)
от его концентрации в растворе. Для всех исследованных веществ
получена линейная зависимость, описываемая уравнением первого порядка
Y = k x X, которая соблюдается при детектировании сигнала на длине
волны 210 нм в диапазоне концентраций от 0,0156 мг/мл до 1,0 мг/мл.
Если для приготовления калибровочных растворов используют
производные амфетамина в форме хлористоводородных или других солей, в
расчеты необходимо внести поправочный коэффициент, позволяющий
определить концентрацию вещества в пересчете на основание.
Количественное содержание производных амфетамина в экспертных образцах
также всегда следует указывать в пересчете на вещество в форме
основания.
На рис. 2 представлен типичный калибровочный график для
производных амфетамина. Калибровки следует периодически проверять,
хроматографируя растворы с известной концентрацией вещества.
Рис. 2. График зависимости площади хроматографического пика
МДА от его концентрации в растворе (спектрофотометрическое
детектирование "Милихром-4" на длине волны 210 нм)
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Анализ образцов, изъятых из незаконного оборота и содержащих
производные амфетамина, проводят следующим образом: точную навеску
анализируемого вещества (тщательно измельченного) экстрагируют в
точном объеме подвижной фазы. При этом концентрация экстрагируемого
вещества в экстрагенте не должна превышать 1,0 мг/мл. Экстракцию
проводят при нормальной температуре в ультразвуковой бане в течение 20
мин. Полученный раствор фильтруют, дегазируют путем продувки гелием и
хроматографируют в указанных условиях.
Выявление хроматографических пиков, соответствующих производным
амфетамина, проводят, сравнивая время удерживания пиков компонентов
хроматограммы анализируемого вещества с временем удерживания
компонентов хроматограммы модельной смеси. Для компонентов с близкими
значениями времени удерживания проводят сравнение УФ-спектров и
применяют метод добавок.
Концентрацию производных амфетамина в экстракте анализируемого
вещества определяют по калибровочным графикам. Содержание производного
амфетамина в анализируемом веществе - Х (%) рассчитывают по формуле:
X = (C x V / m) x 100,
где:
C - концентрация производного амфетамина в экстракте, мг/мл,
найденная по калибровочному графику;
V - объем экстракта, мл;
m - навеска анализируемого вещества, подвергнутого экстракции,
мг.
Предел обнаружения производных амфетамина в анализируемых
экстрактах для указанных условий хроматографирования составляет
-8
величину не менее (1,0 - 1,5) x 10 г. Предел обнаружения определяется
по величине достоверно регистрируемого детектором минимального
аналитического сигнала (высота пика) индивидуального вещества при
длине волны 210 нм. За минимальную высоту пика принимают сигнал, в 5
раз превышающий уровень флуктуационных шумов, регистрируемых
детектором.
На рис. 3 представлена хроматограмма экстракта вещества таблетки
с изображением знака "$", действующим началом которой является МВДБ
(содержание 26% масс.). В процессе экстракции вещества таблетки
подвижной фазой наряду с действующим началом (МВДБ) в растворе
выявлены и другие компоненты, наблюдаемые на хроматограмме как
неидентифицированные хроматографические пики.
Рис. 3. Хроматограмма экстракта таблетки, содержащей МБДБ
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Необходимо обратить внимание на то, что при работе на одной и той
же колонке в одних и тех же условиях анализа коэффициенты емкости и
селективности разделения не должны варьировать от анализа к анализу.
Основным фактором, влияющим на изменение этих параметров, является
нарушение состава подвижной фазы. В случае непостоянства значений
хроматографических параметров необходимо проверить правильность
приготовления подвижной фазы и, если не наступит улучшение
результатов, сменить колонку.
|
Фрагмент документа "ЭКСПЕРТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ <1>".