Фрагмент документа "ЭКСПЕРТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ <1>".
6. Исследование методом УФ-спектроскопии
Наиболее важное значение метод УФ-спектроскопии приобретает при
проведении количественных определений амфетаминов. Метод имеет ряд
достоинств: простота и экспрессность определения, возможность
проведения определений в водных растворах. Кроме того, метод не
требует наличия редких реактивов и растворителей, отсутствует стадия
сложной предварительной пробоподготовки объекта, определению не мешают
такие часто встречающиеся наполнители, как сахара, крахмал, стеараты,
сода.
Оборудование для УФ-спектроскопии имеется практически во всех
экспертно-криминалистических подразделениях. При использовании метода
УФ-спектроскопии для количественных определений необходимо иметь
построенную калибровочную кривую по стандартным растворам на данном
приборе.
В основе количественных определений спектральными методами лежит
закон Бугера-Ламберта-Бера, устанавливающий зависимость между
оптической плотностью и концентрацией анализируемого раствора. Поэтому
перед началом проведения исследований необходимо определить диапазон
концентраций для данного вещества, в котором соблюдается линейная
зависимость оптической плотности (A) от концентрации (C), т.е. A = k x
C, где k - коэффициент молярного поглощения, если концентрация
выражена в моль/л. Для амфетаминов было проведено исследование,
позволяющее определить интервал концентраций, в котором соблюдается
линейная зависимость оптической плотности от концентрации раствора,
т.е. диапазон концентраций, в котором следует проводить количественные
определения (см. табл. 8). В большинстве случаев линейная зависимость
оптической плотности от концентрации соблюдается для значений
оптической плотности до 1,3 - 1,5, а реально измерения ведутся при
оптических плотностях не менее 0,05 - 0,10.
Таким образом, при количественном определении амфетаминов
оптическая плотность раствора должна быть от 0,1 (А ) до 1,5
0,1
(А ). Исходя из данных табл. 8 можно рассчитать рабочий диапазон
1,5
концентраций для каждого из амфетаминов следующим образом:
0,1 x C
табл
концентрация при A = -----------;
0,1 A
табл
1,5 x C
табл
концентрация при A = -----------.
1,5 A
табл
Проведенные таким образом вычисления показывают, что рабочий
диапазон концентраций для амфетаминов составляет примерно 0,01 - 0,08
мг/мл, для мескалина - 0,05 - 0,60 мг/мл. Поэтому при приготовлении
стандартных растворов концентрация раствора должна находиться в
указанных выше рабочих диапазонах.
Таблица 8
ОПТИЧЕСКИЕ ПЛОТНОСТИ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ АМФЕТАМИНОВ
ГИДРОХЛОРИДОВ (ИЗМЕРЕНИЯ ПРОВЕДЕНЫ НА СПЕКТРОФОТОМЕТРЕ
UV-VIS LAMBDA 14P ФИРМЫ PERKIN-ELMER (США) В КВАРЦЕВЫХ
КЮВЕТАХ С ТОЛЩИНОЙ ПОГЛОЩАЮЩЕГО СЛОЯ 10 ММ)
------------------------------------------------------------------
| Название |Концентрация| Длина волны в | Оптическая |
| вещества | (мг/мл), | максимуме | плотность A |
| | C | поглощения (нм) | табл |
| | табл | | |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|МДА |0,021 |286 |0,33 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|МДМА |0,065 |286 |0,61 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|МДЕА |0,076 |286 |0,95 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|ДОЭТ |0,051 |289 |0,75 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|МБДБ |0,047 |286 |0,71 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|ПМА |0,090 |275 |0,63 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|ДОБ |0,071 |295 |1,08 |
|--------------|------------|-----------------|------------------|
|Мескалина |0,140 |268 |0,30 |
|сульфат | | | |
------------------------------------------------------------------
Следует выделить два способа количественного определения веществ
методом УФ-спектроскопии.
Первый способ - самый простой, но он требует наиболее полного
знания о составе объекта и применим к смесям, не содержащим каких-либо
веществ, поглощающих в той же области, что и определяемый компонент.
При этом необходимо убедиться с помощью любого физико-химического
метода в наличии только одного из амфетаминов в пробе и отсутствии
мешающих веществ (веществ, поглощающих в той области спектра, которая
используется для спектрального исследования). Затем следует взять
точную навеску анализируемого вещества (10 - 20 мг), растворить в
точно измеренном объеме дистиллированной воды (50 мл), подкисленной
несколькими каплями концентрированной соляной кислоты, разбавить
раствор в 10 раз и сравнить оптические плотности пробы и стандартного
раствора исследуемого амфетамина в максимуме поглощения (максимумы
поглощения приведены в табл. 8).
Вычисление содержания наркотического средства в анализируемой
пробе проводят по формулам:
A x C
ан ст
C = ---------, (1)
ан A
ст
C x V x 10
ан ан
содержание вещества (%) = -------------- x 100%, (2)
g
где:
C , C - концентрации анализируемого и стандартного
ан ст
растворов, измеренные в максимуме поглощения;
A , A - оптические плотности анализируемого и стандартного
ан ст
растворов, измеренные в максимуме поглощения;
V - объем раствора, в котором растворяли навеску анализируемого
ан
вещества, мл;
g - навеска анализируемого вещества, мг.
При наличии в пробе нескольких амфетаминов данным способом
определять содержание наркотических компонентов нельзя, поскольку
амфетамины имеют близкие значения максимумов поглощения в диапазоне
275 - 295 нм, что не позволяет проводить их индивидуальное
определение. Поэтому в данном случае следует использовать другой
способ определения.
Второй способ количественного определения представляет собой
сочетание методов ТСХ и УФ-спектроскопии, требует более длительной
пробоподготовки объекта, но является универсальным методом при
исследовании различных смесей, содержащих один или несколько
амфетаминов, а также различные наполнители.
Принципиальная схема количественного определения наркотических
веществ методом УФ-спектроскопии с предварительным разделением методом
ТСХ включает несколько этапов. Следует отметить, что количественное
определение проводится после идентификации наркотических веществ в
исследуемом объекте любым физико-химическим методом.
Этап 1. Приготовление раствора, содержащего определяемое
вещество, путем растворения части таблетки или порошка, поступивших на
исследование, в органическом растворителе (метаноле, хлороформе, воде
и др.). При поступлении на исследование небольшого количества водного
раствора можно использовать данный раствор без предварительной
подготовки. При поступлении на исследование нескольких миллилитров
водного раствора желательно проводить 2 - 3-кратную экстракцию водного
раствора органическим растворителем для наиболее полного извлечения и
концентрирования определяемого вещества. Экстракцию органическими
растворителями анализируемого и стандартного (с известной
концентрацией) водных растворов проводят в одинаковых условиях.
Этап 2. Нанесение анализируемого раствора и раствора, содержащего
точно известную концентрацию определяемого вещества (стандартного
раствора), на хроматографическую пластину. Нанесение осуществляется на
подогреваемом столике, входящем в комплект для ТСХ, так как необходимо
наносить, как правило, 10 - 50 мкл раствора в зависимости от
концентрации вещества. Анализируемый и стандартный раствор наносятся в
виде пятна микрошприцем на пластину типа Sorbfil ПСТХ-П-А-УФ.
Количественное содержание вещества в пятнах можно регулировать при
осмотре пластины в УФ-лучах, при этом пятна должны быть четко
различимы и иметь хорошую интенсивность гашения флуоресценции.
Этап 3. Хроматографирование пластины в камере с одной из систем
растворителей, которые рекомендованы в разделе данного пособия,
посвященном исследованию методом тонкослойной хроматографии.
Этап 4. Выделение (смыв) с пластины зон, содержащих определяемое
вещество, полученных из анализируемого и стандартного растворов. После
хроматографирования и высушивания пластины необходимо отметить
расположение зон на пластине карандашом. Затем (для пластин на гибкой,
полимерной основе) следует вырезать три фрагмента в виде квадратов
площадью 1 кв. см, которые содержат зоны определяемого вещества из
анализируемого и стандартного растворов и зону без определяемого
вещества (для "холостого" раствора). Для пластин на стеклянной основе
следует соскабливать отмеченные зоны скальпелем в соответствующие
емкости (например, бюксы). Далее с полученных фрагментов или соскобов
с пластин экстрагируют определяемое вещество путем добавления
одинаковых объемов (1 - 4 мл в зависимости от объема используемых
кварцевых кювет) растворителя или смеси растворителей (например,
смесь: метанол - 5% водный раствор соляной кислоты, 1:1). Таким
образом готовят анализируемый, стандартный и "холостой" растворы для
последующего фотометрирования.
Этап 5. Сравнение оптических плотностей анализируемого и
стандартного растворов в УФ-области, вычисление концентрации
определяемого вещества в анализируемом растворе. Фотометрирование
можно проводить на любом спектрофотометре в УФ-области спектра в
кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм, отмечая
оптическую плотность анализируемого и стандартного растворов
относительно "холостого" раствора в максимуме поглощения. Вычисление
концентрации определяемого вещества в анализируемом растворе проводят
по формуле:
A x C x V
ан ст ст
C = ---------------,
ан A x V
ст ан
где:
C , C - концентрации анализируемого и стандартного
ан ст
растворов, мг/мл;
A , A - оптические плотности анализируемого и стандартного
ан ст
растворов;
V , V - объемы анализируемого и стандартного растворов,
ан ст
нанесенные на хроматографическую пластину, мкл.
Относительная погрешность измерения количества вещества методом
УФ-спектроскопии составляет 3 - 5 отн. %.
|
Фрагмент документа "ЭКСПЕРТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ АМФЕТАМИНА. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ <1>".