3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Не задано. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 12.02.07 МУ 3.3.1.2161-07

11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ИСПЫТУЕМОГО ВАКЦИННОГО
              ШТАММА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ МОРСКИХ СВИНОК

     Цель проведения   испытания  заключается  в  выявлении  возможных
иммунологических  нарушений  в  организме  после   введения   культуры
исследуемого  штамма.  Нарушения  иммунной  системы  могут приводить к
развитию вторичного иммунодефицита,  быть причиной изменений  иммунной
реактивности  организма  на  другие  неродственные антигены,  лежать в
основе неполноценного специфического ответа на сам штамм.
     Введение испытуемого   штамма  туляремийного  микроба  не  должно
приводить к нарушению  иммунологического  гомеостаза  организма,  т.е.
испытуемый   штамм   не   должен   статистически   достоверно  снижать
усредненные иммунологические показатели по сравнению с их величинами в
контрольной группе.
     Методы исследования влияния штамма на иммунную систему  приведены
в Прилож. 5.
     11.1. Определение   относительного   и   абсолютного   количества
Т-лимфоцитов
     Испытуемый вакцинный  штамм  не  должен  вызывать   статистически
достоверного   уменьшения   абсолютного  и  относительного  содержания
Т-лимфоцитов в крови морских свинок,  иммунизированных подкожно дозами
        3            4
5  х  10  и  5  х  10  м.к.  Увеличение  абсолютного  и относительного
количества Т-лимфоцитов свидетельствует об иммунологической активности
испытуемого  и контрольного штаммов туляремийного микроба.  Увеличение
количества Т-лимфоцитов испытуемого штамма не должно быть меньше,  чем
вызываемое контрольным вакцинным штаммом.
     11.2. Определение   относительного   и   абсолютного   количества
В-лимфоцитов
     Испытуемый вакцинный   штамм  не  должен  вызывать  статистически
достоверного  уменьшения  абсолютного  и   относительного   содержания
В-лимфоцитов в крови морских свинок,  иммунизированных подкожно дозами
       3            4
5 х  10  и  5  х  10  м.к.  Увеличение  абсолютного  и  относительного
количества В-лимфоцитов свидетельствует об иммунологической активности
испытуемого и контрольного штаммов туляремийного  микроба.  Увеличение
количества В-лимфоцитов испытуемого штамма не должно быть меньше,  чем
вызываемое контрольным вакцинным штаммом.
     11.3. Определение фагоцитарной активности макрофагов
     Фагоцитарная активность   определяется  процентом  фагоцитирующих
клеток  (ПФ)  и  фагоцитарным  числом   (ФЧ),   которое   определяется
количеством микробных клеток на один фагоцит.
     Вакцинный штамм  туляремийного  микроба   не   должен   оказывать
повреждающего  действия  на иммунную систему морских свинок,  привитых
                          3            4
подкожно  дозами  5  х  10  и  5  х  10  м.к.,  должен   стимулировать
фагоцитирующие   мононуклеары  перитонеального  экссудата  -  повышать
процент фагоцитирующих клеток и фагоцитарное число.  ПФ и ФЧ не должны
статистически значимо отличаться от аналогичных показателей вакцинного
штамма 15 НИИЭГ.
     11.4. Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ)  спонтанная  и
под влиянием Т- и В-клеточных митогенов
     Реакцию бласттрансформации  клеток  выражают   в   виде   индекса
стимуляции  клеток  (ИСК),  представляющего  собой  частное от деления
среднеарифметического  количества  импульсов  в  1  мин.  в  культурах
лимфоцитов,   стимулированных   митогенами,   на  среднеарифметическое
количество импульсов  в  1  мин.  в  контрольных,  не  стимулированных
митогенами, клетках (радиометрическая метка).
     Вакцинный штамм  туляремийного  микроба   не   должен   оказывать
повреждающего  действия  на иммунную систему морских свинок,  привитых
                      3         4
подкожно дозами 5 х 10  и 5 х 10  м.к.,  - не должен снижать ИСК РБТЛ;
должен  стимулировать  функциональную  активность  Т- и В-лимфоцитов -
вызывать статистически значимое повышение ИСК РБТЛ. Повышение ИСК РБТЛ
должно быть не меньше, чем вызываемое вакцинным штаммом 15 НИИЭГ.
     11.5. Определение поликлональной активности В-лимфоцитов
     Для получения   этого   показателя   определяют   число   клеток,
продуцирующих антитела к эритроцитам барана (АОК),  методом локального
гемолиза в геле в разные сроки (3, 7, 14 и 28 сут.).
     Вакцинный штамм туляремийного микроба у морских свинок,  привитых
             3        4
дозами 5 х 10 и 5 х 10  м.к., может вызывать повышение  поликлональной
активности В-лимфоцитов.
     11.6. Исследование иммунореактивности на гетерологичный антиген
     Проводят определение АОК к эритроцитам барана (ЭБ).
     Вакцинный штамм туляремийного микроба у морских свинок,  привитых
                3            4
дозами  5  х  10  и  5  х  10  м.к.,  не  должен  вызывать   вторичное
иммунодефицитное  состояние  -  не  должен  снижать  иммунный ответ на
гетерологичный антиген.