Фрагмент документа "3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ".
1.3. Определение биохимических свойств испытуемого
вакцинного штамма туляремийного микроба
1.3.1. Для определения биохимической активности испытуемого и
контрольного вакцинных штаммов используют культуры со скошенного агара
2 пассажа. Определение ферментации углеводов (сахара, спирта) проводят
в специальной жидкой среде <*> или среде Dawns <**>.
--------------------------------
<*> Состав и приготовление жидкой среды для определения
ферментации углеводов F. tularensis: пептон - 1 г; натрий хлорид
(NaCl) - 5 г; калий гидрофосфат (K HPO ) - 0,3 г; L-цистеин
2 4
гидрохлорид - 0,1 г; феноловый красный - 0,02 г; сахар - 10 г (или
глицерин - 10 мл) на 1 л дистиллированной воды. Смесь подогревают до
полного растворения, остужают, устанавливают рН 7,2, разливают во
флаконы по 100 мл. Стерилизуют автоклавированием при 115 град.С в
течение 20 мин. и разливают по 2 мл в пробирки. Пробирки должны быть
химически чистыми и простерилизованными. Цвет среды -
оранжево-красный. Культуру засевают по 1 полной бактериологической
петле и инкубируют при температуре 37 град.С до 5 - 6 сут.
<**> Среду Dawns готовят согласно "Руководству по лабораторной
диагностике туляремии" (Иркутск, 1986): мясопептонный агар - 100 мл,
цистеин - 0,05 г, индикатор бромтимоловый синий - 0,4 мл спиртового
раствора, глицерин - 1 мл или по 1 г углеводов (глюкоза, мальтоза,
манноза, левулеза). Приготовленную среду стерилизуют при 112 - 115
град.С в течение 20 мин., затем охлаждают до 40 - 50 град.С и
добавляют 5% (от общего объема) нормальной лошадиной сыворотки,
обязательно устанавливают рН 7,0 +/- 0,1 (подкисляют соляной кислотой
в разведении 1:1 или подщелачивают 20%-м раствором натрия гидроксида).
Цвет среды должен быть зеленым. После чего готовят скошенные столбики
среды в пробирках. Культуру высевают по 2 - 3 полные
бактериологические петли на пробирки со скошенной средой Dawns с
глюкозой, мальтозой, маннозой, левулезой и глицерином. При
положительной реакции цвет среды изменяется на лимонный.
В случае ферментации углевода цвет среды становится желтым, при
отрицательной реакции цвет среды остается без изменений.
1.3.2. Пробы на образование сероводорода и отсутствие выделения
индола ставят в соответствии с Инструкцией по применению систем
индикаторных бумажных для идентификации микроорганизмов (СИБ) - ФСП
42-0100-3827-03.
Учет результатов: испытуемый вакцинный штамм образует сероводород
и не выделяет индол.
1.3.3. Определение фосфатазной активности. В 1 мл 0,5%-го водного
раствора додецилсульфата натрия готовят микробную взвесь испытуемого
штамма туляремийного микроба и добавляют 1 мг фенолфталеиндифосфата.
Смесь инкубируют при температуре 37 град.С в течение 30 мин. и
добавляют 1 каплю 1 N натрия гидроксида.
Учет результатов: испытуемый вакцинный штамм не изменяет цвет
реакционной смеси.
1.3.4. Определение пенициллиназной активности. Фильтровальную
бумагу, смоченную растворами бензилпенициллина (50000 ед./мл) и
крезолового красного (1 мг/мл), помещают на дно чашки Петри. На
поверхность бумаги наносят каплю микробной взвеси испытуемого штамма
туляремийного микроба и 30 мин. инкубируют при температуре 20 град.С.
Учет результатов: испытуемый вакцинный штамм окрашивает пробы в
желтый цвет.
1.3.5. Определение чувствительности к эритромицину. Осуществляют
методом дисков по методике, изложенной в "Методических указаниях по
определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом
диффузии в агар с использованием дисков" (МЗ СССР, Москва, 1983).
|
Фрагмент документа "3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ".