3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Не задано. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 12.02.07 МУ 3.3.1.2161-07

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНОЙ ВИРУЛЕНТНОСТИ ИСПЫТУЕМОГО
                   ВАКЦИННОГО ШТАММА НА БЕЛЫХ МЫШАХ

     Определение остаточной  вирулентности  проводят  параллельно  для
испытуемого  и  контрольного  вакцинных  штаммов.  Для этого 140 белых
мышей массой 18 - 20 г делят на 2 группы методом случайной выборки  по
70 животных, 1 группа - для испытуемого штамма, 2 - для контрольного.
     Используют  двухсуточную  агаровую  культуру   каждого  штамма  2
пассажа,  выращенную на питательной среде Мак-Коя или на   FT - агаре.
                                                  9
Готовят  взвесь  культуры  концентрацией  1  х  10   м. к. / мл. Затем
последовательно  десятикратно  разводят  в   0,9 %   растворе   натрия
             -1       -8                                 8
хлорида  с 10    до 10  ,  что  соответствует  от  1 х 10     до    10
м.к./мл, и вводят животным подкожно  в  заднюю  правую  лапку  по  0,5
                                                   6        5
мл приготовленных взвесей, что соответствует 5 х 10 , 5 х 10 ,   5   х
  4           3          2
10 ,  5  х  10 ,  5  х 10 , 50 и 5 м.к.  Каждую  дозу  каждого  штамма
вводят  10  животным.  Для  подсчета  LD      и расчета вводимых   доз
                                        50
                                              -6
производят высев  культуры  из  разведения  10   по 0,1 мл на 5 чашек,
содержащих FT-агар.  Гибель мышей учитывают в сроки до 21  сут.  после
введения  культуры.  Животных,  павших  на  5  -  10 сут.,  вскрывают,
обращают внимание на патоморфологические изменения,  производят  посев
селезенки  методом  отпечатка на питательную среду Мак-Коя или FT-агар
(посевы инкубируют при температуре (37 +/-  1)  град.С  в  течение  10
сут.,  ежедневно  просматривая).  Если  в  посевах обнаруживается рост
культуры, ее идентифицируют в РИФ (реакции прямой иммунофлуоресценции)
с  иммуноглобулинами  диагностическими  флуоресцирующими туляремийными
(ФСП   42-0180-5315-04).   Гибель   мышей   от   испытуемого    штамма
устанавливают   на  основании  патологоанатомических  данных  вскрытия
(плотный инфильтрат на месте  введения,  гиперемия  сосудов  подкожной
клетчатки  и  паховых  лимфатических  узлов,  увеличение  и уплотнение
селезенки) и выделения из посевов туляремийного микроба.
     Вакцинный   штамм    туляремийного    микроба   должен   обладать
остаточной  вирулентностью для белых мышей, LD    его  должна  быть  в
                                              50
              2          6
пределах от 10  до 2 х 10  м.к.
     Величину LD   вычисляют по формуле:
                50

                 lg LD   = lg D - l (SUM L  - 0,5),
                      50                  i

     где:
     D - максимальная из испытанных доз;
     L - отношение числа животных,  погибших при введении данной дозы,
      i
к общему числу животных, которым эта доза была введена;
     SUM L  - сумма значений L , вычисленных для всех испытанных доз.
          i                   i
     Если величина LD   для контрольного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ
                     50
окажется выше или ниже лимита,  контроль повторяют по той же методике;
если величина LD   для испытуемого штамма не удовлетворяет требованиям
                50
лимита,  а  контрольного  штамма - удовлетворяет,  испытуемый штамм не
соответствует  требованиям,  предъявляемым  к  вакцинным  штаммам   по
степени остаточной вирулентности.


                                                          Приложение 3

                                                        (обязательное)