3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Не задано. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 12.02.07 МУ 3.3.1.2161-07

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
           ИСПЫТУЕМОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА НА МОРСКИХ СВИНКАХ

     Стабильность биологических    свойств    культуры     испытуемого
вакцинного  штамма  туляремийного  микроба определяют после 10-кратных
пассажей ее на морских свинках  массой  400  -  450  г  при  подкожном
способе введения.
     Для первого пассажа  используют  двухсуточную  агаровую  культуру
испытуемого  штамма второй генерации,  выращенную на среде Мак-Коя или
                                                         9
на FT-агаре. Готовят взвесь культуры концентрацией 1 х 10 м.к./мл (как
описано  в  Прилож.  1) и шприцем объемом 5 мл вводят по 1 мл в правую
паховую область 2 морским свинкам.  Через 4 сут.  животных  умерщвляют
хлороформом  и  вскрывают.  Для  последующего  пассажа  у умерщвленных
животных забирают регионарные (паховые) лимфатические узлы и селезенку
(400 - 500 мг),  помещают их в фарфоровую ступку с 1 - 2 г стерильного
мелкого речного песка и растирают пестиком до гомогенного состояния.
     Затем в ступку вносят 5 мл  0,9%-го  раствора  хлорида  натрия  и
суспендируют гомогенат; дают осесть крупным кусочкам тканей и песку на
дно ступки, надосадочную жидкость забирают шприцем и вводят подкожно в
правую  паховую  область  по 0,5 мл 2 морским свинкам (второй пассаж).
Параллельно делают посев суспензии на скошенную  питательную  среду  в
пробирках  Мак-Коя  или  FT-агар  для  подтверждения  наличия культуры
испытуемого штамма  F.  tularensis.  Посевы  помещают  в  термостат  и
инкубируют  при  температуре  (37  +/-  1)  град.С  в  течение  2 сут.
Аналогично второму пассажу проводят пассажи  с  третьего  по  десятый,
каждый  раз  на  двух  свинках и с параллельным высевом на питательную
среду.  Если в  каком-либо  из  пассажей  культура  не  выделяется,  в
дальнейшем  используют  культуру,  полученную  на питательной среде от
предыдущего пассажа.
     Субкультуру, выделенную  после  десятого  пассажа,  а  также  все
субкультуры,  выделенные  от  погибших  животных  и   умерщвленных   с
явлениями  генерализации,  параллельно с культурой контрольного штамма
F.  tularensis  15  НИИЭГ  изучают:  по  культурально-морфологическим,
биохимическим,  серологическим  свойствам,  безвредности (по методике,
описанной в Прилож. 1).
     Безвредность определяют  по  укороченной схеме для морских свинок
              5        9
(дозы - 5 х 10 и 5 х 10 м.к.) и  по  полной  схеме  для  белых  мышей;
вскрытие и исследование животных проводят на 7,  14 и 21-е сут.  после
введения. Методика исследования - в соответствии с Прилож. 3. Культура
испытуемого  вакцинного  штамма F.  tularensis после 10 пассажа должна
быть  стабильной  и  типичной   по   вышеперечисленным   признакам   в
соответствии с Прилож. 1 и 2.


                                                          Приложение 5

                                                        (обязательное)