3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Не задано. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 12.02.07 МУ 3.3.1.2161-07

5.3. Выделение лимфоцитов из крови морских свинок

     Кровь у  морских  свинок берут из сердца в объеме 2 мл в пробирку
со средой 199 или раствором Хенкса с (25 +/- 0,5)  ед./мл  гепарина  в
соотношении  1  часть  крови  и  3  части  среды.  После перемешивания
разведенную кровь наслаивают в пробирке на водный раствор  верографина
плотностью  (1,077  +/-  0,002)  г/мл,  не  допуская смешивания слоев.
Соотношение объемов 2:1. Затем центрифугируют (15 +/- 1) мин. при (450
+/- 25) g. Пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром собирают
образовавшееся над  слоем  верографина  беловатое  кольцо  лимфоцитов.
Полученная  взвесь содержит примесь градиента плотности и тромбоцитов,
которые  удаляют  путем  2-кратного  отмывания  клеток  в  охлажденном
растворе Хенкса без ионов магния и кальция.  Режим центрифугирования -
(10 +/- 1) мин.  при (280 +/- 20) g.  По завершении процесса отмывания
клеток  осадок ресуспендируют в среде 199 или среде Игла.  Необходимая
для дальнейших исследований концентрация клеток должна составлять 2  х
  6
10  клеток в 1 мл.