3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Не задано. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 12.02.07 МУ 3.3.1.2161-07

7.1. Определение иммуногенности при подкожном
                  способе иммунизации морских свинок

     Перед испытанием штамма на иммуногенность распределяют 66 морских
свинок  массой 300 - 400 г методом случайной выборки на три группы:  1
группа - 30 животных - для иммунизации контрольным  вакцинным  штаммом
F.  tularensis  15  НИИЭГ,  2  группа  - 30 животных - для иммунизации
испытуемым штаммом, 3 группа - 6 животных - контроль.
     Для определения  иммуногенности  используют двухсуточные агаровые
культуры  испытуемого  и   контрольного   вакцинных   штаммов   второй
генерации,  выращенные  на  питательной среде Мак-Коя или на FT-агаре.
                                           9
Готовят взвеси культур концентрацией 5 х 10  м.к./мл  в  0,9% растворе
натрия  хлорида  по  стандартному  образцу  мутности  ОСО 42-28-85П 10
единиц соответствующего года выпуска.  Затем  делают  последовательные
                                                       -9
десятикратные разведения этих взвесей до разведения  10  (5  м.к./мл).
Морских  свинок  иммунизируют подкожно в область верхней трети правого
бедра испытуемым  и  контрольным  вакцинными штаммами по 6 животных на
                   4             3               2             1
каждую дозу: 5 х 10 м.к., 5 х  10   м.к.,  5 х 10  м.к., 5 х 10   м.к.
и 5 м.к.  Культуру вводят одним шприцем  в  объеме  1  мл,  начиная  с
меньшей  дозы.  Для  подсчета ED   или  расчета  количества фактически
                                50                               -7
введенных туляремийных бактерий производят высев из разведения 10   по
0,1 мл на 5 чашек с FT-агаром.
     Тест -  заражающий  штамм F.  tularensis 503/840 (голарктического
подвида) должен  обладать  типичными  культурально-морфологическими  и
биохимическими  свойствами.  Должен  быть  высоковирулентным  -  1 Dcl
(Dosis certa letalis) для морских свинок при  подкожном  заражении  не
должна  превышать  5  м.к./мл.  Для  заражения используют двухсуточную
агаровую культуру заражающего тест-штамма  2  пассажа,  выращенную  на
питательной среде  Мак-Коя  или  на FT-агаре.  Готовят взвесь культуры
                     9
концентрацией 5 х  10  м.к./мл  в  0,9%  растворе  натрия  хлорида  по
стандартному  образцу  мутности ОСО 42-28-85П 10 единиц,  затем делают
последовательные десятикратные разведения этой  взвеси  до  разведения
  -9
10  (5 м.к./мл), что соответствует 1 Dcl. Для подсчета ED  или расчета
                                                         50
количества фактически введенных туляремийных бактерий производят высев
                -7
из разведения 10   по 0,1 мл на 5 чашек,  содержащих питательную среду
(кровяную, гемоглобиновую или FT-агар), по обычной методике.
     Через 25   -   30  сут.  после  иммунизации  морских  свинок  (30
иммунизированных  контрольным  штаммом  и  30   испытуемым)   заражают
подкожно в область верхней трети левого бедра в дозе,  соответствующей
1000  Dcl  вирулентного  штамма  туляремийного  микроба.   Вирулентную
культуру  животным  вводят  в объеме 1 мл.  Одновременно заражают по 3
контрольне морские свинки дозами 1  Dcl  и  1000  Dcl.  Наблюдение  за
зараженными животными ведут в течение 30 сут.  Все контрольные морские
свинки  должны  погибнуть  в  срок  до  16  сут.   Погибших   животных
регистрируют  и  вскрывают  общепринятым  методом,  а  органы  и ткани
(селезенку,  печень,  лимфатический узел  из  места  введения,  кровь)
подвергают   бактериологическому   исследованию,  высевая  их  методом
отпечатков на питательную среду Мак-Коя или FT-агар.
     Учет результатов  посевов  производят через 3 - 7 суток.  Морских
свинок с типичными для туляремии  изменениями  и  выделением  культуры
туляремийного   микроба  считают  погибшими  от  туляремии.  Животных,
погибших от неспецифических причин,  исключают из числа взятых в опыт.
В  случае  выживания  контрольных  свинок  опыт  следует  повторить  с
использованием более вирулентного заражающего штамма.
     Величину ED   испытуемого   и   контрольного   вакцинных  штаммов
                50
вычисляют  по  методу  Кербера,  описанному  И.П.  Ашмариным  и   А.А.
Воробьевым (1962):

                 lg ED   = lg D - l (SUM L  - 0,5),
                      50                  i

     где:
     D - максимальная из испытанных доз;
     L -  отношение  числа  животных,  иммунизированных данной дозой и
      i
выживших  после  заражения,   к   общему   числу   животных,   которых
иммунизировали этой дозой;
     SUM L  - сумма значений L , найденных для всех испытанных доз.
          i                   i
     ED   вакцинного штамма для  морских  свинок  должна составлять не
       50
более 1000 м.к.