ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА "АТИПИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ" (SARS) МЕТОДОМ ПЦР. ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. Рекомендации. Главный государственный санитарный врач РФ. 03.05.03

3. Организация работ при проведении исследований
                         с использованием ПЦР

     3.1.   Исследования  материала  от  больного  подозрительного  на
зараженность  вирусом SARS методом ПЦР проводят в учреждениях, имеющих
разрешение на работу с ПБА I - II групп патогенности.
     3.2.  Для  проведения  генодиагностических  исследований выделяют
четыре  отдельные  комнаты,  предназначенные  для выполнения следующих
этапов ПЦР-анализа:
     а  -  первичная  подготовка,  выделение  РНК и постановка реакции
обратной транскрипции (синтез кДНК);
     б - проведение ПЦР;
     в - учет результатов реакции амплификации;
     г   -  приготовление  реакционных  смесей  для  реакции  обратной
транскрипции и ПЦР (чистое помещение).
     Комнаты    "а",   "б",   "в"   укомплектовываются   емкостями   с
дезинфицирующим средством и баками для автоклавирования.
     3.3.   Помещение   "а"   должно   быть   оборудовано  боксирующим
устройством   (боксом   безопасности).  В  боксе  размещают  поддон  с
салфеткой,  смоченной  6%  раствором  перекиси водорода, для разбора и
первичной подготовки проб, оборудование для выделения РНК и проведения
реакции обратной транскрипции: микроцентрифугу, вортекс, твердотельный
термостат. В этой комнате находится низкотемпературный холодильник для
хранения  нативного материала. В помещении "б" расположен амплификатор
для  постановки  ПЦР.  В  помещении  "в"  находится  оборудование  для
проведения   электрофореза,   учета   и  документирования  результатов
(источник   тока,   камера   для   электрофореза,  трансиллюминатор  с
устройством  для документирования результатов электрофореза и поддон с
салфеткой, смоченной 6% раствором перекиси водорода.
     3.4.  Подготовку  реакционных  смесей  (master  mix)  для реакции
обратной   транскрипции   и  ПЦР  осуществляют  в  отдельном  "чистом"
помещении  "г".  Пробирки  с  приготовленными  реактивами  передают  в
комнаты "а" и "б" для внесения в них исследуемых проб.
     3.5.  Каждое  помещение  должно  иметь  свой набор автоматических
пипеток,  наконечников (с фильтрами), пластиковой и стеклянной посуды,
используемых только в данной комнате (боксе) и имеющих соответствующую
маркировку.  Наконечники  должны строго соответствовать автоматическим
пипеткам,  пробирки для амплификации - термоциклерам (в соответствии с
инструкцией фирмы-производителя прибора).
     3.6.  Аптечка  дополнительно  комплектуется:  1% раствором борной
кислоты, интерфероном.