ПРОЕКТИРОВАНИЕ, СТРОИТЕЛЬСТВО И ЭКСПЛУАТАЦИЯ ЖИЛЫХ ЗДАНИЙ, ПРЕДПРИЯТИЙ КОММУНАЛЬНО-БЫТОВОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ, УЧРЕЖДЕНИЙ ОБРАЗОВАНИЯ, КУЛЬТУРЫ, ОТДЫХА, СПОРТА. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 06.01.04 МУ 2.1.2.1829-04

4.6.1. Определение сроков выживания микроорганизмов
         (тест-культур) на поверхности полимерных материалов
     
     Для исследований  образцы  принимаются при наличии сопровождающей
технической  документации,  содержащей  данные  о  сроке  изготовления
испытуемых материалов.
     Санитарно-микробиологические исследования  полимерных  материалов
предваряет    обязательная   подготовка   образцов   к   исследованию,
заключающаяся в их очищении от постороннего  загрязнения  путем  мытья
поверхности  моющими  средствами  под  проточной  водой  с последующим
ополаскиванием дистиллированной водой и высушиванием.
     При определении   сроков   выживания   отдельных   патогенных   и
санитарно-показательных  микроорганизмов   (тест-культур)   испытуемые
образцы могут подвергаться какому-либо способу стерилизации (например,
в автоклаве или обжиганию обработанной спиртом поверхности) в  режиме,
не   изменяющем   внешнего  вида  материала  и  его  структуры,  также
антимикробных свойств, если таковые были приданы полимерному материалу
при изготовлении.
     Определение сроков выживания патогенных и санитарно-показательных
микроорганизмов (тест-культур) проводится в три этапа:
     - нанесение культуры микроорганизмов на  поверхность  испытуемого
материала   и   контрольного   образца   (в  качестве  контроля  может
использоваться,   например,   стекло,    являющееся    инертным    для
микроорганизмов);
     - отбор  проб  через  определенные  промежутки времени и посев на
питательные  среды  (специфичные   для   данной   тест-культуры)   для
качественного или количественного учета микроорганизмов, выращивание;
     - учет  результатов,  статистическая  обработка  и  интерпретация
полученных данных.
     Выбор микроорганизмов,  в  отношении  которых проводится изучение
влияния полимерного материала,  определяется  целевым  предназначением
последнего.  Чаще  всего в качестве тест-культур используются культуры
S.aureus, E.coli, P.aeruginosa.
     Количественное определение  микроорганизмов  на  единице  площади
исследуемого    образца    материала   осуществляется   на   основании
предварительного  расчета  исходной  концентрации  микроорганизмов   в
единице объема заражающей взвеси.
     Нанесение взвеси  тест-культуры  микроорганизмов  на  поверхность
полимерного материала производится капельным или аэрозольным методом.
     При использовании   капельного   метода   на    одинаковой    для
контрольного  и  опытного  образцов  площади  распределение капель при
одинаковом   объеме   наносимой   взвеси   должно   быть   максимально
равномерным.
     Аэрозольный метод обязательно предполагает применение специальных
герметичных  камер  с  распылителем  и  требует  не  только  отработки
исходной  концентрации  микроорганизмов  в  единице  объема заражающей
суспензии,  но и времени  ее  распыления,  длительности  перемешивания
воздуха   в   камере,   времени   оседания   крупных  частиц  аэрозоля
бактериальной взвеси.
     После нанесения  тест-культуры  и  до  отбора  проб контрольные и
опытные   образцы   материалов   должны   находиться    в    условиях,
препятствующих  оседанию  бактерий из воздуха (например,  в камере при
использовании аэрозольного метода или в  чашках  Петри  при  капельном
методе), в одинаковых условиях температуры, освещенности и влажности.
     Отбор проб      может      осуществляться     общепринятыми     в
микробиологической практике методами - методом смывов или  отпечатков.
При  количественном  учете  микроорганизмов  важным  является  полнота
забора клеток с поверхности образца,  с этой целью смывы  и  отпечатки
можно  производить  с  одного и того же участка 3 - 4 раза (одинаковое
число раз как с опытных,  так и контрольных  образцов).  При  подсчете
выросшие   на   плотных  средах  колонии,  снятые  с  одного  участка,
суммируют. Многократный отбор проб с одного участка особенно важен при
изучении материалов с заданными антибактериальными свойствами.
     Кроме того,  при  использовании  образцов  полимерных  материалов
небольшого   размера   оптимальным   для   наиболее   полного   снятия
микроорганизмов с их поверхности является отмывание мерным количеством
стерильного физиологического раствора при непосредственном  погружении
образцов  в  колбы  или  широкие  пробирки  со  стеклянными бусами,  с
последующим посевом  определенных  кратных  объемов  смывной  жидкости
(позволяющих  произвести  количественный  учет) на плотные питательные
среды.
     Для достижения     статистической    достоверности    результатов
необходимо   использовать   репрезентативное    количество    образцов
(повторностей) как в опыте, так и контроле.
     При количественном   определении    содержания    микроорганизмов
подсчитываются  все  выросшие  на  плотных  питательных  средах  после
термостатирования   колонии.   Для    подтверждения    роста    именно
тест-культур,  а  также  для изучения влияния полимерных материалов на
биологические свойства микроорганизмов 2 -  3  колонии  окрашивают  по
Граму   и   проводят   изучение  биологических  свойств  общепринятыми
методами.
     Сравнение количества  колоний,  выросших  при  посеве  смывов   с
полимерных  материалов,  с  количеством  колоний  в контроле позволяет
определить степень влияния исследуемых  образцов  на  жизнеспособность
тех  или  иных  используемых  для заражения микроорганизмов.  Учитывая
динамику отмирания  микроорганизмов  на  образцах  за  разные  периоды
времени,  можно  получить  дополнительные  данные  о  характере  этого
влияния.