ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРАВИЛ
ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА A ПТИЦ
ПРИКАЗ
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ
3 апреля 2006 г.
N 105
(Д)
В целях повышения эффективности борьбы с гриппом птиц и в
соответствии с пунктом 5.2.11 Положения о Министерстве сельского
хозяйства Российской Федерации, утвержденного Постановлением
Правительства Российской Федерации от 24 марта 2006 г. N 164 (Собрание
законодательства Российской Федерации, 2006, N 14, ст. 1543),
приказываю:
утвердить Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа A
птиц согласно приложению.
Министр
А.В.ГОРДЕЕВ
3 апреля 2006 г.
N 105
Зарегистрировано в Министерстве юстиции РФ
27 апреля 2006 г.
7761
Приложение
к Приказу Минсельхоза России
от 3 апреля 2006 года
N 105
ВЕТЕРИНАРНЫЕ ПРАВИЛА
ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА A ПТИЦ
1. Область применения
1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к
организации лабораторной диагностики гриппа A птиц (далее - грипп
птиц).
1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на
территории Российской Федерации органами государственной власти,
предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями,
организациями, общественными объединениями, независимо от их
подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.
2. Общие положения
2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические
тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее
- лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных
учреждениях.
2.2. Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление
в исследуемых объектах ветеринарного надзора:
вируса гриппа птиц;
РНК вируса гриппа птиц;
антигенов вируса гриппа птиц;
антител к вирусу гриппа птиц.
2.3. При проведении лабораторных тестов могут быть использованы
методы лабораторных исследований, применяющие:
тесты, утвержденные в установленном порядке;
тесты, которые реализуются с использованием тест-систем,
зарегистрированных в установленном порядке в Российской Федерации.
3. Обязательные требования по отбору проб
для проведения диагностики гриппа птиц
3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит
ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.
3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается
сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора
проб, юридическом или физическом лице - владельце птицы и месте его
нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.
3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб
патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких,
трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или
убитой с диагностической целью птицы.
3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5 - 10
трупов или патологический материал от 5 - 10 трупов, клоакальные и/или
трахеальные смывы от 10 - 15 голов, 1 - 10 сборных проб помета от
стада.
У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.
Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на
60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали
крест-накрест.
3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц
рекомендуется отбирать у 25 - 30 птиц из стада (партии), из одного
птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).
Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки,
увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до
образования сгустка при комнатной температуре или в термостате при 37
град. C в течение 1 - 2 часов, затем обводят иглой или пастеровской
пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на
16 - 18 часов при температуре 2 - 4 град. C. Образовавшуюся прозрачную
без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в
отдельные, чистые пробирки.
Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или
вакуумной пробирки).
Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для
получения сыворотки в течение 10 - 15 минут при 1000 об./мин. для
осаждения свободных эритроцитов.
Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови,
полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и
через 4 - 10 дней.
3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в
контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается
однократное замораживание сывороток.
При транспортировке проб соблюдают установленные
ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к
транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные
агенты 3-й группы патогенности.
3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается
сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4 град. C.
При необходимости для увеличения срока хранения диагностические
образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80
град. C.
4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований
4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается
применение следующих методов:
а) для выявления вируса гриппа птиц - биопроба на СПФ (свободных
от патогенной микрофлоры) - цыплятах с обязательным последующим
подтверждением специфичности биологической реакции;
б) для выделения вируса гриппа птиц - метод выделения вируса на
СПФ - куриных эмбрионах или в культуре клеток;
в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;
иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или
нескольких белков вируса;
иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее -
РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее - ИЭОФ);
иммунохроматографические методы (далее - ИХА);
радиоиммунный анализ (далее - РИА);
непрямая гем- и латексагглютинация;
реакция связывания комплемента (далее - РСК);
г) для обнаружения гемагглютинина (гемагглютинирующей активности)
вируса гриппа птиц:
реакция гемагглютинации (далее - РГА) с подтверждением
специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных
антител к вирусному гемагглютинину;
д) для обнаружения РНК вируса:
полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР);
ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
е) для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:
ИФА;
РДП и ИЭОФ;
ИХА;
РИА;
РТГА;
РСК;
ж) для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:
РТГА;
сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта;
ПЦР;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных
антител к вирусному гемагглютинину;
з) для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:
РТГА;
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных
антител к вирусному гемагглютинину.
4.2. Применение иных тестов допускается для получения
предварительных результатов.
4.3. Методы проведения лабораторных исследований реализуются на
основе утверждаемых в установленном порядке методик проведения
обязательных диагностических исследований.
4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в
зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца. |