4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ.
ЭКСПРЕСС-МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ
ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ, ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ
И ПОДЗЕМНЫХ ИСТОЧНИКОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МЕТОДИКА
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ
18 января 1999 г.
N 1100/83-99-23
(Д)
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Департамента
госсанэпиднадзора
Минздрава России
А.А.МОНИСОВ
18 января 1999 года
N 1100/83-99-23
Дата введения:
с момента утверждения
Методические указания разработаны творческим коллективом в
составе: Военная академия химической защиты Ишутин В.А., Стехин А.А.,
Яковлева Г.В., Корякин Ю.Н., ВЦМК "Защита" Зубарев А.Ф., НИИ экологии
человека и гигиены окружающей среды имени А.Н. Сысина РАМН Доскина
Т.В., Рахманин Ю.А., Недачин А.Е., Михайлова Р.И., Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России Стреляева Н.Е., Кривопалова Н.С.,
Подунова Л.Г., Скачков В.Б.
Утверждены и введены в действие.
Введены впервые.
1. Область применения
Настоящие методические рекомендации являются первым опытом
методического обеспечения экспресс-контроля качества питьевой воды и
воды источников хозяйственно-питьевого водоснабжения по
микробиологическим показателям, введенным:
СанПиНом "Требования к качеству воды централизованных систем
питьевого водоснабжения. Контроль качества" 2.1.4.559;
ГОСТом 2761 "Контроль качества воды поверхностных и подземных
водоисточников", и предназначены для микробиологов городских,
районных, областных, краевых и республиканских центров
госсанэпиднадзора и специалистов ведомственных лабораторий,
осуществляющих контроль качества воды. Методики регламентируют
проведение микробиологического экспресс-контроля загрязнения воды.
Экспресс-метод определения общего микробного
числа хемилюминесцентным методом
Настоящие методические рекомендации устанавливают методику
хемилюминесцентного количественного определения в 1 куб. см воды
централизованного хозяйственного питьевого водоснабжения и в
поверхностных водоисточниках клеток мезофильных и мезотрофных бактерий
в вегетативной форме.
1. Принцип методики
Количественное определение клеток бактерий в вегетативной форме в
воде основано на их способности инициировать хемилюминесценцию
люминола в щелочной среде, интенсивность которой пропорциональна числу
клеток, находящихся в анализируемой пробе.
2. Чувствительность и сущность метода
Бактериальные клетки в вегетативной форме могут быть обнаружены
хемилюминесцентным методом в количестве 2 КОЕ/куб. см. Определению не
мешают продукты метаболизма бактериальных клеток, их отмершие
фрагменты, катионы металлов с переменной валентностью в концентрациях
до одного ПДК. Определение проводят на хемилюминометре ЛИК,
концентрирование клеток на мембранный фильтр не проводят.
3. Средства измерений, материалы и реактивы
----------------------------------------------------------------------
| 3.1. Средства измерений | |
| Хемилюминометр ЛИК | ТУ 000.000.АЖП |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| 3.2. Вспомогательные устройства | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Дозатор пипеточный | ТУ 64-1-3329 |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Пробоотборник для отбора проб воды | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Пинцет | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Стерильный флакон с притертой пробкой | |
| вместимостью 0,5 куб. дм | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| 3.3. Материалы | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Бумага фильтровальная | ГОСТ 12026 |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Мембранный фильтр "Владисарт" | |
| для ОМЧ SM-13806, поры 0,45 мкм | БГКП-SM-13906 |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| 3.4. Реактивы | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Натрий серноватистокислый | СТ СЭВ 223 |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Реактив на основе люминола | |
| 3%-ный водный раствор перекиси водорода | |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Вода дистиллированная | ГОСТ 6709 |
|-----------------------------------------------|--------------------|
| Спирт этиловый реактификованный | ГОСТ 5962 |
----------------------------------------------------------------------
4. Требования по безопасности
4.1. При работе с реактивом и спиртом соблюдаются требования
безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и
легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.
4.2. При работе на приборе ЛИК соблюдают правила
электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по
эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию
лаборант с опытом работы на приборе ЛИК и прошедшие обучение в ФЦ ГСЭН
МЗ РФ.
6. Условия проведения измерений
Измерения проводятся при атмосферном давлении 730 - 760 мм рт.
ст., температуре окружающего воздуха (20 +/- 15 град.С) в лабораторных или
полевых условиях при отсутствии атмосферных осадков.
7. Подготовка к выполнению измерений
7.1. Прибор ЛИК готовят к работе в соответствии с инструкцией по
эксплуатации.
7.2. Приготовление рабочего реактива.
В чистую пробирку пипеточным дозатором наливают 0,2 куб. см
3%-ной водной перекиси водорода и прибавляют к ней 6,0 +/- 0,1 куб. см
реактива.
Приготовленный рабочий реактив годен для анализа в течение 24
часов с момента его приготовления.
7.3. Приготовление исходных разведений чистых культур E.coli или
Вас. subtilis (Вас. cereus) для построения градуировочного графика в
диапазоне концентраций клеток от 10 до 100 КОЕ/куб. см.
С косячка или из чашки Петри с помощью петли (крючка) переносят
колонию чистой культуры в стерильную пробирку с соблюдением мер
стерильности и добавляют в нее стерильный физраствор объемом 10,0 куб.
см. Содержимое тщательно перемешивают до исчезновения видимых сгустков
и фильтруют через 3-слойный марлевый стерильный фильтр.
После фильтрации исходного разведения с помощью стандартов
мутности или камеры Горяева-Тома определяют исходную концентрацию
бактериальных клеток.
Готовят серию разведений с соблюдением мер стерильности следующим
образом. От исходного разведения отбирают 2,0 +/- 0,1 |