МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. Рекомендации. Главный государственный санитарный врач РФ. 24.12.04 ФЦ/4022

Метод мембранных фильтров

     Объем  испытуемой  пробы  для  посева  выбирают с таким расчетом,
чтобы  не  менее  чем  на 2-х фильтрах выросли изолированные колонии в
количестве от 5 до 50.
     Выполнение анализа
     Через мембранные  фильтры  профильтровывают  2  - 3 десятикратных
объема испытуемой пробы.  Фильтры с посевом помещают на азидную  среду
или среду ЖСТ и инкубируют при температуре 37 +/- 0,5 град.C в течение
24 - 48 часов.
     Учет результатов на среде ЖСТ
     Учет результатов на среде ЖСТ производят через 24 - 28 часов. Для
учета  выбирают  фильтры, на которых выросло не более 20 - 30 колоний.
Подсчитывают  характерные  для энтерококков колонии: плоские крупные с
ровными  краями,  белые  или бледноокрашенные с небольшим кремовым или
розовым оттенком, а также малиновые. Последние образованы E. faecalis.
     Если  выросли  колонии  другого  вида - выпуклые белые мелкие или
ярко окрашенные, то их принадлежность к энтерококкам можно подтвердить
по отсутствию каталазной активности и по характерной морфологии клеток
при микроскопии мазков, окрашенных по Граму.
     Каталазный  тест  можно  выполнить  путем  нанесения петлей капли
3%-ной  перекиси  водорода  на  подозрительные  колонии.  Более  точно
каталазный тест выполняют на предметном стекле, нанося петлей культуру
и  после  подсушивания  на  воздухе добавляя каплю свежеприготовленной
3%-ной  перекиси  водорода  и  прикрывая  покровным  стеклом.  Наличие
пузырьков газа - положительный тест.
     Учет результатов на азидной среде
     Для  учета  выбирают  фильтры,  на  которых  выросло  от  5 до 50
колоний.
     Подсчитывают  колонии,  характерные для энтерококков: выпуклые, с
ровными  краями,  розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с
темно-красным нечетко оформленным центром.
     Как  правило, все колонии, которые растут на азидной среде, можно
отнести к фекальным энтерококкам, имеющим индикаторное значение.
     Очень мелкие (на пределе видимости невооруженным глазом), плоские
разных оттенков колонии не учитывают.
     При  необходимости  подтвердить  наличие  энтерококков  по  2 - 3
колонии каждого типа микроскопируют после окраски по Граму.
     При    обнаружении   в   мазках   грамположительных   полиморфных
диплококков дают положительный ответ.
     Вычисление индекса энтерококков
     Подсчитанное  число  колоний  энтерококков  суммируют  и делят на
объем, профильтрованный через фильтры, на которых велся подсчет.
     Для  расчета  индекса  количество колоний энтерококков суммируют,
умножают  на 1000 и делят на объем, профильтрованный через фильтры, на
которых велся подсчет.