МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. Рекомендации. Главный государственный санитарный врач РФ. 24.12.04 ФЦ/4022

Титрационный метод определения индекса БГКП
                          (колиформ) в почве

     Из  первого  разведения  почвенной  суспензии  (1:10),  прошедшей
предварительную  обработку,  стерильной  пипеткой  берут 10,0 куб. см,
засевают  во  флаконы  с  90,0  куб. см жидкой лактозо-пептонной среды
(ЛПС)  или  среды  Кесслера,  что  соответствует  засеву  1  г  почвы.
Соотношение  между  навеской  почвы или ее эквивалентным разведением и
питательной средой 1:9, а для сред двойной концентрации - 1:1.
                                                           2    3
     Посев  меньших  количеств  (0,01 г, 0,001 г, то есть 10 , 10    и
т.д.) делают по 1,0 куб.  см из соответствующих  разведений  почвенной
суспензии в пробирки с 9,0 куб. см тех же сред. Титрование проводят до
                                 6
разведения 1:1000000,  то есть 10  с  регулярной  сменой  пипеток  при
переходе  от одного разведения к другому.  Посевы инкубируют в течение
48 ч при (37 +/- 1) град.C,  через (24 +/-  2)  ч  инкубации  проводят
предварительную   оценку   посевов.   Отсутствие   газообразования   и
помутнения через 48 ч  инкубации  выдают  окончательный  отрицательный
ответ.  газообразования  или только помутнения - производится высев на
поверхность среды Эндо.
     Чашки с посевами  помещают  в  термостат  на  (18  -  24)  ч  при
температуре  (37 +/- 1) град.C.  При отсутствии роста на чашках выдают
отрицательный ответ. При наличии на поверхности среды Эндо розовых или
красных  колоний,  малиновых  с  металлическим  блеском  или  без него
проводят микроскопию колоний  с  последующей  постановкой  оксидазного
теста.  Оксидазный  тест  предназначается  для дифференциации бактерий
семейства Enterobacteriaceae от бактерий рода  Pseudomonoas  и  других
видов сапрофитных бактерий. Микроскопирование и постановка оксидазного
теста проводится по МУК 4.2.1018-01.
     При наличии  оксидазоотрицательных  грам  (-)палочек  по  2  -  3
колонии каждого типа засевают параллельно в 2  пробирки  в  полужидкую
или  жидкую  с  поплавком  среду  с  лактозой,  разлитую  в пробирки в
количестве 4,0 - 5,0 куб.  см,  для подтверждения ферментации  лактозы
при  температуре  (37  +/-  1)  град.C.  Учет  производят  через  18 ч
инкубации.  Если за это время происходит образование кислоты  и  газа,
это  свидетельствует  о  наличии  бактерий  группы  кишечных  палочек.
Признаком  газообразования  является  появление  пузырьков  газа,   об
образовании   кислоты   свидетельствует  изменение  цвета  среды.  При
появлении  только  кислоты  пробирки  оставляют   в   термостате   для
окончательного  ответа  еще  на  24 ч,  при отсутствии газообразования
через  этот  срок  выдают  окончательный  отрицательный   ответ,   при
появлении газообразования - положительный ответ.  После выявления БГКП
устанавливают титр,  при этом  принимается  то  предельное  разведение
почвы, в котором обнаруживаются колиформы. Для перевода титра в индекс
необходимо 1000 разделить на число,  выражающее титр.  Так,  при титре
0,01 индекс равен 100, а при титре 0,1 индекс равен 10.