Фрагмент документа "3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ".
5. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИСПЫТУЕМОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА
ПО ВИДОВЫМ ПРИЗНАКАМ
Идентификацию испытуемого вакцинного штамма осуществляют на
основании следующих признаков: 1) морфологии и окраски бактерий в
мазках и специфического свечения в РИФ (прямой реакции
иммунофлуоресценции); 2) характера роста на питательной среде Мак-Коя;
3) отсутствия роста на простых питательных средах типа мясопептонного
агара (МПА), агара Хоттингера; 4) биохимических свойств, характерных
для представителя соответствующего подвида F. tularensis; 5)
агглютинации диагностической туляремийной сывороткой для РА; 6)
полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами, специфичными для вида
F. tularensis; 7) ПЦР с праймерами, специфичными для потенциального
вакцинного штамма.
5.1. Туляремийный микроб относится к роду Francisella, виду
tularensis. Внутри вида F. tularensis различают три подвида -
голарктический, неарктический и среднеазиатский. Туляремийные микробы
размером 0,2 - 0,7 мкм, неподвижные, грамотрицательные, с выраженным
полиморфизмом (от кокковидных до палочковидных форм), жгутиков не
имеют, образуют капсулу слизистой консистенции, при окраске мазков по
Граму окрашиваются фуксином. В мазках плотных питательных сред
преобладают кокковидные формы, в мазках из органов животных
преобладают коккобактерии. Слабо воспринимают красители и окрашиваются
бледнее, чем прочие микроорганизмы.
5.2. F. tularensis - факультативный анаэроб, не растет на простых
питательных средах типа мясопептонного агара или бульона; растет слабо
или не растет на средах, не обогащенных кровью, ее фракциями или
желтком куриных яиц. Температурный оптимум для развития характерного
S- или SR-типа колоний - 36 - 37 °С. На свернутой желточной среде
Мак-Коя растет в виде извилистого, слегка блестящего, почти
бесцветного налета, на питательном FT-агаре (ФСП 42-01811372-01)
образует беловато-серые колонии диаметром не менее 1 мм, круглые, с
ровными краями, выпуклые и блестящие. При разреженном посеве они
достигают диаметра 2 мм и более, рост становится заметным через 2 - 3
сут. культивирования. В зависимости от используемой жидкой питательной
среды туляремийный микроб может расти как на поверхности в виде
пленки, так и вызывать диффузное помутнение бульона.
5.3. Туляремийный микроб расщепляет с образованием кислоты без
газа глюкозу, левулезу, мальтозу, маннозу, образует сероводород, не
выделяет индол. Штаммы неарктического и среднеазиатского подвидов
ферментируют глицерин и цитруллин, обладают фосфатазной активностью,
чувствительны к эритромицину. Неарктический подвид обладает
пенициллиназной активностью, вирулентен для кроликов, среднеазиатский
подвид - пенициллиназной активностью и вирулентностью для кроликов не
обладает. Штаммы голарктического подвида не ферментируют глицерин (за
исключением японского биовара) и цитруллин, обладают пенициллиназной
активностью, не обладают фосфатазной, по чувствительности к
s
эритромицину разделяются на два биовара: Ery (высокочувствительный) и
r
Еry (резистентный).
Таблица
ХАРАКТЕРИСТИКА ПОДВИДОВ F. TULARENSIS
------------------------------------------------------------------
| Признак | Подвид |
| |----------------------------------------------|
| |голарктический|неарктический |среднеазиатский |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Ферментация |+ |+ |+ |
|глюкозы | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Ферментация |+ |+ |+ |
|мальтозы | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Ферментация |+ |+ |+ |
|маннозы | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Ферментация |+ |+ |+ |
|левулезы | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Ферментация |- |+ |+ |
|глицерина | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Образование |+ |+ |+ |
|сероводорода | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Образование |- |- |- |
|индола | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Ферментация |- |+ |+ |
|цитруллина | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Фосфатазная |- |+ |- |
|активность | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Пенициллиназная |+ |+ |- |
|активность | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Чувствительность |+/- |+ |+ |
|к эритромицину | | | |
|-----------------|--------------|--------------|----------------|
|Вирулентность для|- |+ |- |
|кроликов | | | |
------------------------------------------------------------------
Примечание: (+) наличие, (-) отсутствие признака.
5.4. Штаммы туляремийного микроба, предлагаемые в качестве
вакцинных, должны:
- обладать типичными культурально-морфологическими,
биохимическими и антигенными свойствами, характерными для
представителя соответствующего подвида F. tularensis;
- содержать не менее 80% иммуногенных (SR-тип) колоний;
- агглютинироваться до титра сыворотки с образованием
крупнохлопчатого агглютината отраслевым стандартным образцом (ОСО
42-28-28-84П) сыворотки диагностической туляремийной агглютинирующей
для РА сухой;
- обнаруживаться специфическое свечение при окрашивании культур
иммуноглобулинами диагностическими флуоресцирующими туляремийными
сухими (ФСП-42-0181-5315-04).
Методики определения видовых признаков испытуемого и контрольного
штаммов туляремийного микроба приведены в прилож. 1 к Приказу
Министерства здравоохранения РФ N 125 от 14.04.99 "Об усилении
мероприятий по профилактике туляремии", Прилож. 1 к настоящим
Методическим указаниям и МУ 3.1.2007-05 "Эпидемиологический надзор за
туляремией".
|
Фрагмент документа "3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ".