Фрагмент документа "О НАДЗОРЕ ЗА ОБОРОТОМ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГМО".
IX. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГМО
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕСТ-СИСТЕМ
9.1. Метод количественного определения генно-инженерно -
модифицированной сои и кукурузы с использованием наборов "TaqMan GMO
Soy Detection Kit" и "TaqMan GMO Maize Detection Kit":
- наборы реактивов предназначены для количественного определения
в пищевых продуктах генно-инженерно-модифицированной кукурузы или сои;
- метод основан на ПЦР в реальном времени;
- амплифицируется участок эндогенной ДНК, характерной для всех
линий кукурузы или сои, и участок рекомбинантной ДНК в ходе двух
независимых реакций с использованием соответствующих праймеров и
зондов, меченых флуоресцентным красителем;
- регистрация флуоресценции красителей осуществляется приборами
типа ABI-PRISM 7000, Rotor Gene 3000 и анализируется с использованием
программного обеспечения приборов;
- относительное содержание ГМО в пищевом продукте рассчитывается
с использованием стандартных образцов состава путем сравнения
результатов измерения флуоресценции красителя FAM, специфичного для
ГМО, с результатами измерения флуоресценции красителя VIC,
специфичного для всех линий сои или кукурузы;
- выделение ДНК из стандартных образцов состава и из исследуемых
образцов осуществляется одновременно одним методом с помощью СТАВ или
набора реактивов "ДНК-сорб-С".
9.2. Метод идентификации и количественного определения ГМО с
использованием наборов "Ампликвант ГМ соя", "Ампликвант ГМ кукуруза",
"АмплиСенс ГМ соя FTR", "АмплиСенс ГМ кукуруза FTR", разработанных
ФГУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора.
9.2.1. Набор реактивов "Ампликвант ГМ соя":
- предназначен для количественного определения
генно-инженерно-модифицированной сои;
- метод основан на ПЦР в реальном времени;
- амплифицируется участок эндогенной ДНК, характерной для всех
линий сои, и участок рекомбинантной ДНК, промотора 35 S из вируса
мозаики цветной капусты, в ходе двух независимых реакций с
использованием соответствующих праймеров и зондов, меченых
флуоресцентным красителем;
- регистрация флуоресценции красителей осуществляется приборами
типа ABI-PRISM 7000, Rotor Gene 3000 и анализируется с использованием
программного обеспечения приборов;
- относительное содержание ГМО в пищевом продукте рассчитывается
с использованием стандартных образцов состава путем сравнения
результатов измерения флуоресценции красителя FAM, специфичного для
ГМО, с результатами измерения флуоресценции красителя VIC,
специфичного для всех линий сои;
- выделение ДНК из стандартных образцов состава и из исследуемых
образцов осуществляется одновременно одним методом с помощью СТАВ или
набора реактивов "ДНК-сорб-С".
9.2.2. Набор реактивов "Ампликвант ГМ кукуруза":
- предназначен для количественного определения генно-инженерно -
модифицированной кукурузы;
- метод основан на ПЦР в реальном времени;
- амплифицируется участок эндогенной ДНК, характерной для всех
линий кукурузы, и участок рекомбинантной ДНК, промотора 35 S из вируса
мозаики цветной капусты, в ходе двух независимых реакций с
использованием соответствующих праймеров и зондов, меченых
флуоресцентным красителем;
- регистрация флуоресценции красителей осуществляется приборами
типа ABI-PRISM 7000, Rotor Gene 3000 и анализируется с использованием
программного обеспечения приборов;
- относительное содержание ГМО в пищевом продукте рассчитывается
с использованием стандартных образцов состава путем сравнения
результатов измерения флуоресценции красителя FAM, специфичного для
ГМО, с результатами измерения флуоресценции красителя VIC,
специфичного для всех линий кукурузы;
- выделение ДНК из стандартных образцов состава из исследуемых
образцов осуществляется одновременно одним методом с помощью СТАВ (или
набора реактивов "ДНК-сорб-С").
9.2.3. Набор реактивов "АмплиСенс ГМ соя FRT":
- предназначен для идентификации генно-инженерно-модифицированной
сои в пищевых продуктах и растительном сырье методом ПЦР в реальном
времени;
- анализ представляет собой проведение трех ПЦР в одной пробирке,
для каждой из которых используются специфичные праймеры и меченый
флуоресцентными красителями зонд;
- в двух реакциях выявляются последовательности ДНК, специфичные
для просмотра 35 S из вируса мозаики цветной капусты и терминатора NOS
in Agrobactetium tumefaciens, третья предназначена для амплификации
эндогенной ДНК, специфичной для всех линий сои;
- выделение ДНК осуществляется с помощью СТАВ или набора
реактивов "ДНК-сорб-С".
9.2.4. Набор реактивов "АмплиСенс ГМ кукуруза FRT":
- предназначен для идентификации генно-инженерно-модифицированной
кукурузы в пищевых продуктах и растительном сырье методом ПЦР в
реальном времени;
- анализ представляет собой проведение трех ПЦР в одной пробирке,
для каждой из которых используются специфичные праймеры и меченый
флуоресцентными красителями зонд;
- в двух реакциях выявляются последовательности ДНК, специфичные
для промотора 35 S из вируса мозаики цветной капусты и терминатора NOS
из Agrobactetium tumefaciens, третья предназначена для амплификации
эндогенной ДНК, специфичной для всех линий кукурузы;
- выделение ДНК осуществляется с помощью СТАВ или набора
реактивов "ДНК-сорб-С".
9.2.5. Выделение ДНК с использованием набора реактивов
"ДНК-сорб-С":
- буфер для лизирующего реагента и раствор для отмывки 1 прогреть
при 64 град.C до полного растворения кристаллов;
- в каждую пробирку внести по 400 мкл буфера для лизирующего
реагента и по 17 мкл лизирующего реагента, тщательно перемешать;
- инкубировать при 64 град.C 1 час, периодически встряхивая на
вортекс;
- центрифугировать 5 минут при 12000 - 14000 об./мин.;
- отобрать и перенести надосадочную жидкость в объеме 200 - 350
мкл в чистые пробирки;
- центрифугировать 5 секунд при 5000 об./мин.;
- тщательно ресуспендировать сорбент на вортекс, в каждую
пробирку добавить по 25 мкл ресуспендированного сорбента, перемешать
на вортекс, оставить в штативе на 10 - 15 минут, перемешивая каждые 2
минуты;
- центрифугировать 1 минуту при 5000 об./мин., удалить
супернатант;
- добавить по 300 мкл раствора для отмывки 1, перемешать на
вортекс до полного ресуспендирования сорбента, центрифугировать 1
минуту 5000 об./мин.;
- удалить супернатант;
- добавить по 500 мкл раствора для отмывки 2, перемешать на
вортекс до полного ресуспендирования сорбента, центрифугировать 1
минуту при 10000 - 12000 об./мин., отобрать супернатант;
- повторить процедуру отмывки, отобрать супернатант полностью,
поместить пробирки в термостат 64 град.C на 5 - 10 минут для
подсушивания сорбента, при этом крышки пробирок должны быть открыты;
- добавить по 50 мкл ТЕ-буфера для элюции ДНК, перемешать на
вортекс;
- поместить в термостат 64 град.C на 5 - 8 минут, периодически
встряхивая на вортекс;
- центрифугировать 1 минуту при 12000 - 14000 об./мин.;
- раствор ДНК хранить в течение 1 недели при температуре от 2 до
8 град.C и в течение 1 года - при температуре минус 20 град.C.
9.3. Методы количественного определения сои линии 40-3-2,
кукурузы линии GA 21, кукурузы линии NK 603, кукурузы линии MON 863,
разработанные Центром "Биоинженерия" РАН.
9.3.1. Наборы реактивов для количественного определения сои линии
40-3-2, кукурузы линии GA 21, кукурузы линии NK 603, кукурузы линии
MON 863 методом ПЦР в реальном времени:
- в состав каждого набора входят 2 пробирки матричной реакционной
смеси, 1 пробирка с термостабильной полимеразой, 8 пробирок со
стандартными разведениями рекомбинантной ДНК;
- реакционная смесь на одну пробу содержит 9,25 мкл матричной
реакционной смеси, 0,75 мкл термостабильной полимеразы, 32,0 мкл
деионизированной воды, конечный объем каждой пробы - 50 мкл;
- реакционную смесь разлить в пробирки по 42 мкл на пробу;
- добавить 8 мкл раствора ДНК в следующем порядке - контроль без
ДНК, ДНК 0%, ГМО 0,5%, ГМО 100%, исследуемые образцы;
- центрифугировать;
- условия амплификации: 94 град.C - 9 мин. - 1 цикл (94 град.C -
30 сек.) + (62 град.C - 30 сек.) + (72 град.C - 1 мин.) - 40 циклов;
- наборы реактивов оптимизированы для работы на амплификаторах
типа ABI Prism 7000/7700.
9.3.2. Метод выделения ДНК с применением технологии Wizard,
Promega:
- навеску исследуемого продукта массой 100 мг поместить в
микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл;
- добавить 300 мкл - буфера I (50 мМ Трис HCl, pH - 8,0; 10 мМ
ЭДТА; 50 мкг/мл панкреатической РНКазы свободной от ДНКаз, 3 М
гуанидин тиоцианата) при комнатной температуре;
- растереть пробу в пробирке пестиком до гомогенного состояния;
- добавить 400 мкл буфера II (2% додецилсульфат натрия, 0,2 М
NaOH) и перемешать на вортекс;
- инкубировать при 65 град.C 30 минут, перемешать на вортекс,
охладить до комнатной температуры;
- добавить 400 мкл буфера III (5 М ацетат калия, pH 4,5),
перемешать на вортекс 2 минуты;
- центрифугировать 10 минут при 13000 об./мин.;
- надосадок отобрать и перенести в чистую пробирку типа Эппендорф
вместимостью 1,5 мл, добавить смолу Wizard MaxiPreps из расчета 100
мкл смолы на 200 мкл надосадочной жидкости и перемешать на вортекс;
- при помощи стерильного шприца емкостью 2 мл прокачать смесь
через микроцентрифужную колонку;
- стерильным шприцом емкостью 2 мл прокачать через
микроцентрифужную колонку 2 мл промывочного буфера (0,2 М NaCl, 20 мМ
Трис HCl, pH - 8,0, 5 мМ ЭДТА смешать в соотношении 5:7 с 96%
этанолом);
- поместить микроколонку в микроцентрифужную пробирку типа
Эппендорф вместимостью 1,5 мл;
- центрифугировать 1 минуту при 13000 об./мин.;
- поместить микроколонку в чистую микроцентрифужную пробирку типа
Эппендорф вместимостью 1,5 мл;
- добавить в колонку 100 мкл деионизированной воды, нагретой до
65 град.C, центрифугировать 15 секунд при 13000 об./мин.;
- измерить концентрацию раствора ДНК и довести ее до 10 нг/мкл;
- раствор ДНК хранить при минус 20 град.C.
9.4. Количественное определение сои линии 40-3-2, кукурузы линий
GA 21, MON 810, T-25, Bt-176, Bt-11 с использованием наборов реагентов
GeneScan Analytics GmbH.
9.4.1. Наборы реактивов для определения сои линии 40-3-2
TM
(GMOQuant Roundup Ready Soy), кукурузы линии Bt-176 (GMOQuant
TM
Maximizer Bt 176 corn), кукурузы линии Bt-11 (GMOQuant Bt-11 Corn),
TM
кукурузы линии MON 810 (GMOQuant YieldCard MON 810), кукурузы линии
TM
T-25 (GMOQuant LibertyLink T25 Corn), кукурузы линии GA 21 (GMOQuant
TM
Roundup Ready GA 21 Corn):
- используется реакционная смесь, позволяющая амплифицировать
участок эндогенной ДНК, характерной для кукурузы или сои, и
реакционная смесь, позволяющая амплифицировать участок рекомбинантной
ДНК;
- каждая реакционная смесь содержит соответствующие праймеры и
зонд, меченный флуоресцентным красителем FAM, специфичный для ГМО и
VIC, специфичный для сои или кукурузы;
- интенсивность флуоресценции измеряют с помощью приборов типа
ABI-PRISM 7000, iCycler iQ и анализируют с применением программного
обеспечения приборов.
9.4.2. Метод выделения ДНК с помощью набора реагентов "GENESpin":
- набор "GENESpin" предназначен для выделения геномной ДНК из
пищевых продуктов;
- исследуемый образец пищевого продукта гомогенизировать,
добавить лизируюший буфер, содержащий денатурирующие агенты и
детергенты;
- лизат центрифугировать;
- добавить связывающий буфер и этанол для создания оптимальных
условий осаждения ДНК на фильтре со специально подобранным
силикагелем;
- промыть буфером для удаления потенциальных ингибиторов
ДНК-полимеразы;
- ДНК элюировать водой или буфером, хранить при минус 20 град.C.
9.5. Методы количественного определения сои линии 40-3-2,
кукурузы линии MON 810, разработанные ГУ ВНИИ сельскохозяйственной
биотехнологии РАСХН:
9.5.1. Принцип методов:
- для количественного определения ГМО одновременно проводятся две
независимые реакции в одной пробирке, одна реакция позволяет
обнаруживать ДНК сои или кукурузы, другая - последовательность,
специфичную для сои линии 40-3-2 или кукурузы линии MON 810;
- для обнаружения ДНК сои или кукурузы используется зонд, меченый
красителем R6G, для обнаружения генетической конструкции - красителем
FAM или ROX в зависимости от типа прибора;
- интенсивность флуоресценции измеряют с помощью приборов типа
АНК-32, ABI-PRISM 7000, iCycler iQ и анализируют с применением
программного обеспечения приборов;
- определение процентного содержания ГМО осуществляется с
использованием калибровочных образцов (КО), которые представляют собой
смеси ДНК растения дикого типа (0%) и ДНК ГМО (100%) в определенном
процентном соотношении, разность значений пороговых циклов двух
реакций для калибровочных образцов используется для построения
калибровочной прямой. С помощью калибровочной прямой рассчитывается
процентное содержание ДНК ГМО в анализируемых пробах.
9.5.2. Метод выделения ДНК "Сорб-ГМО":
- измельченные навески образцов перенести в одноразовые
микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл или 2,0 мл;
- внести в каждую пробирку по 600 мкл лизирующего буфера и 10 мкл
лизирующего реагента, тщательно перемешать;
- инкубировать 50 - 60 минут при 65 град.C, периодически
перемешивая на вортекс;
- внести в каждую пробирку по 500 мкл хлороформа, интенсивно
перемешать, центрифугировать 10 минут при 12 000 - 14 000 об./мин.;
- верхнюю водную фазу в объеме 300 мкл аккуратно, не захватывая
хлороформ и межфазный слой, перенести в пробирку с сорбентом,
интенсивно перемешать на вортекс до полного ресуспензирования
сорбента, инкубировать при комнатной температуре 10 минут,
периодически встряхивая;
- центрифугировать суспензию при 10 000 об./мин. 1 минуту,
удалить супернатант;
- добавить к осадку 500 мкл промывочного раствора А, перемешать
на вортекс до максимального ресуспензирования сорбента, инкубировать
при комнатной температуре 2 - 3 минуты, периодически встряхивая;
- центрифугировать при 7 000 об./мин. 30 секунд, удалить
супернатант;
- добавить к осадку 500 мкл промывочного раствора Б, перемешать
на вортекс до максимального ресуспензирования сорбента;
- центрифугировать суспензию при 7 000 об./мин. 30 секунд,
удалить супернатант;
- добавить к осадку 500 мкл промывочного раствора В, перемешать
на вортекс до максимального ресуспензирования сорбента;
- центрифугировать при 7 000 об./мин. 30 секунд, удалить
супернатант;
- поместить пробирки с открытыми крышками в термостат при
температуре 65 град.C на 5 минут для испарения жидкости;
- к сухому осадку добавить 100 мкл ТЕ буфера, перемешать на
вортекс, инкубировать 10 минут при температуре 65 град.C, перемешивая
каждые 2 минуты;
- центрифугировать при 12 000 - 14 000 об./мин. 2 минуты;
- чистую надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку
объемом 0,5 - 1,5 мл, не захватывая сорбент.
9.5.3. Порядок проведения исследований:
- взять необходимое количество пробирок с реакционной смесью из
тест-системы из расчета N + 8, где N - количество анализируемых
образцов;
- после размораживания реакционной смеси центрифугировать
пробирки 30 - 60 секунд при более 4000 об./мин.;
- внести в пробирки по 2 мкл исследуемых образцов и в последнюю
очередь калибровочных образцов сои или кукурузы в двух повторах,
перемешать многократным пипетированием, поместить пробирки в
амплификатор;
- программа амплификации для сои: 10 мин./95 град.C, 20 сек./95
град.C, 50 сек. / 62 град.C, съемка 50 циклов, 25 град.C - хранение;
- программа амплификации для кукурузы: 10 мин./95 град.C, 20 сек.
/ 95 град.C, 50 сек./60 град.C, съемка 50 циклов, 25 град.C -
хранение.
9.6. Для определения ГМО растительного происхождения допустимо
использование тест-систем с техническими характеристиками,
аналогичными указанным выше и разрешенными для использования в
установленном порядке.
Приложение 2.1
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации ДНК сои (ген лектин).
Продукт ПЦР - 118 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной сои.
3. Контроль качества реакционной смеси - ПЦР в отсутствие
матричной ДНК.
4 - 7. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из продуктов
переработки сои.
Приложение 2.2
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации ДНК кукурузы (ген зеин).
Продукт ПЦР - 329 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
2 - 5. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной кукурузы.
6. Контроль качества реакционной смеси - ПЦР в отсутствие
матричной ДНК.
Приложение 2.3
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации ДНК картофеля (ген фосфоенолпируваткарбоксилазы).
Продукт ПЦР - 1149 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из клубней
нетрансгенного картофеля.
3. Контроль качества реакционной смеси - ПЦР в отсутствие
матричной ДНК.
Приложение 2.4
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК (мишень - промотор 35S).
Продукт ПЦР - 195 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1 - 3. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян сои
линии 40-3-2.
4. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной сои.
5. Контроль качества реакционной смеси - ПЦР в отсутствие
матричной ДНК.
6. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.5
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК (мишень - терминатор NOS).
Продукт ПЦР - 180 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1 - 3. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян сои
линии 40-3-2.
4. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной сои.
5. Контроль качества реакционной смеси - ПЦР в отсутствие
матричной ДНК.
6. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.6
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК (маркерный ген nptII).
Продукт ПЦР - 173 пары нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Контроль качества реакционной смеси - ПЦР в отсутствие
матричной ДНК.
2. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
3. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии MON 863.
Приложение 2.7
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для генетической
конструкции сои линии 40-3-2.
Продукт ПЦР - 169 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
2. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной сои.
3 - 4. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян сои
линии 40-3-2.
Приложение 2.8
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для генетической
конструкции сои линии А2704-12.
Продукт ПЦР - 185 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной сои.
3 - 6. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из семян сои
линии А2704-12.
Приложение 2.9
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для генетической
конструкции сои линии А5547-127.
Продукт ПЦР - 150 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян сои линии
А5547-127.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян
нетрансгенной сои.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., Лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.10
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для генетической
конструкции кукурузы линии Bt-176.
Продукт ПЦР - 189 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии Bt-176.
3. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
Приложение 2.11
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для генетической
конструкции кукурузы линии MON 810.
Продукт ПЦР - 149 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии MON 810.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
4. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии MON 810.
Приложение 2.12
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии MON
863.
Продукт ПЦР - 84 пары нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии MON 863.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.13
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии NK
603.
Продукт ПЦР - 108 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии NK 603.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.14
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии Bt
11.
Продукт ПЦР - 110 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
2. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
3. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии Bt 11.
Приложение 2.15
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии T 25.
Продукт ПЦР - 149 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии T 25.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.16
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии GA
21.
Продукт ПЦР - 270 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
2. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
3. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии GA 21.
Приложение 2.17
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии MIR
604.
Продукт ПЦР - 894 пары нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
2. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
3. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии MIR 604.
4. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
Приложение 2.18
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для кукурузы линии MON
88017.
Продукт ПЦР - 94 пары нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна
нетрансгенной кукурузы.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из зерна кукурузы
линии MON 88017.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.19
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для сахарной свеклы
линии H7-1.
Продукт ПЦР - 110 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
2 - 3. Продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК из корнеплодов
сахарной свеклы линии H7-1.
4. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из корнеплодов
нетрансгенной сахарной свеклы.
Приложение 2.20
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для риса, устойчивого к
глюфосинату аммония, линии LL 62.
Продукт ПЦР - 88 пар нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян риса линии
LL 62.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из семян
нетрансгенного риса.
3. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.21
(обязательное)
Пример представления данных электрофореза по результатам
идентификации рекомбинантной ДНК, характерной для сортов картофеля,
устойчивых к колорадскому жуку:
Рассет Бурбанк Ньюлив, Супериор Ньюлив, Елизавета 2904/kgs,
Луговской 1210 amk.
Продукт ПЦР - 102 пары нуклеотидов.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
1. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из клубней картофеля
сорта Рассет Бурбанк Ньюлив.
2. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из клубней картофеля
сорта Супериор Ньюлив.
3. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из клубней картофеля
сорта Елизавета 2904/kgs.
4. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из клубней картофеля
сорта Луговской 1210 amk.
5. Продукт ПЦР, полученный на препаратах ДНК из клубней
нетрансгенного картофеля.
6. Маркер молекулярной массы (100 п.н., лаборатория Био-Рад).
Приложение 2.22
(обязательное)
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Зависимость величины сигнала флуоресценции (Rn) от количества
циклов ПЦР для гена лектина.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Зависимость величины сигнала флуоресценции (Rn) от количества
циклов ПЦР для рекомбинантной ДНК.
Расчет количества рекомбинантной ДНК.
По кривой амплификации определяется пороговый цикл для каждой ПЦР
(Ct). Рассчитывается разность между Ct специфичным для 35 S промотора
и Ct специфичным для гена лектина. Относительное количество
рекомбинантной ДНК в пробе определяется по формуле:
-(дельтаCt sam - дельтаCt ref)
w = 2 x c ref,
где:
дельтаCt sam - разность между значениями Ct для 35 S промотора и
гена лектина в исследуемом образце;
дельтаCt ref - разность между значениями Ct для 35 S промотора и
гена лектина в стандартном образце;
c ref- концентрация стандартного образца.
Приложение 2.23
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Зависимость величины сигнала флуоресценции (Rn) от количества
циклов ПЦР для гена зеина.
Рисунок
----------------------------------------------------------------------
Не приводится.
Зависимость величины сигнала флуоресценции (Rn) от количества
циклов ПЦР для рекомбинантной ДНК.
Расчет количества рекомбинантной ДНК.
По кривой амплификации определяется пороговый цикл для каждой ПЦР
(Ct). Рассчитывается разность между Ct специфичным для 35 S промотора
и Ct специфичным для гена зеина. Относительное количество
рекомбинантной ДНК в пробе определяется по формуле:
-(дельтаCt sam - дельтаCt ref)
w = 2 x c ref,
где:
дельтаCt sam - разность между значениями Ct для 35 S промотора и
гена лектина в исследуемом образце;
дельтаCt ref - разность между значениями Ct для 35 S промотора и
гена лектина в стандартном образце;
c ref - концентрация стандартного образца.
Приложение 3
УТВЕРЖДЕНО
Постановлением
Главного государственного
санитарного врача
Российской Федерации
от 30 ноября 2007 года
N 80
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ
ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ
|
Фрагмент документа "О НАДЗОРЕ ЗА ОБОРОТОМ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГМО".