МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ. Указание. Главный государственный санитарный врач РФ. 09.02.01 МУК 4.2.1018-01

8.3. Определение общих и термотолерантных
              колиформных бактерий титрационным методом

     8.3.1. Определение понятия показателя
     Определение понятия показателей ОКБ и ТКБ по п. 8.2.1.
     8.3.2. Область применения
     Титрационный метод может быть использован:
     - при  отсутствии  материалов  и  оборудования,  необходимых  для
выполнения анализа методом мембранной фильтрации;
     - при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;
     - в   случае   преобладания   в   воде   посторонней  микрофлоры,
препятствующей  получению  на  фильтрах  изолированных  колоний  общих
колиформных бактерий.
     8.3.3. Принцип метода
     Метод основан  на накоплении бактерий после посева установленного
объема воды в жидкую питательную  среду  с  последующим  пересевом  на
дифференциальную  плотную питательную среду с лактозой и идентификации
колоний по культуральным и биохимическим тестам.
     8.3.4. Выполнение анализа
     При исследовании  питьевой  воды  качественным  методом  (текущий
санэпиднадзор, производственный контроль) засевают 3 объема по 100 мл.
     При исследованиях воды с целью количественного определения ОКБ  и
ТКБ  при  повторном анализе производят посев:  3 объемов по 100 мл,  3
объемов по 10 мл, 3 объемов по 1 мл.
     Каждый объем исследуемой воды засевают в лактозо-пептонную среду,
приготовленную по п.  5.5. Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и
1  мл  концентрированной  лактозо-пептонной  среды,  посев  1 мл пробы
проводят в 10 мл среды обычной концентрации.
     Посевы инкубируют  при 37 +/- 1 ЬC в течение 48 ч.  Не ранее 24 ч
инкубации проводят предварительную оценку посевов.  Из  емкостей,  где
отмечено  наличие  роста  (помутнение) и образование газа,  производят
высев бактериологической петлей на сектора среды Эндо (п.  5.4.1)  для
получения изолированных колоний.
     Емкости без  наличия  роста  и  образования  газа   оставляют   в
термостате  и  окончательно  просматривают  через  48  ч.  Посевы  без
признаков роста считают отрицательными, и дальнейшему исследованию они
не подлежат.  Из емкостей,  где отмечено помутнение и образование газа
или только помутнение, делают высев на сектора среды Эндо.
     Посевы на  среде  Эндо  инкубируют  при температуре 37 +/- 1 ЬC в
течение 18 - 20 ч.
     При образовании  помутнения  и газа в среде накопления и росте на
среде  Эндо  колоний,  типичных  для  лактозоположительных   бактерий:
темно-красных  или  красных,  с  металлическим  блеском  или без него,
выпуклых с красным центром и отпечатком  на  питательной  среде,  дают
положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном
объеме пробы.
     Наличие ОКБ требуется подтвердить:
     - если в среде накопления отмечено только помутнение;
     - если  принадлежность  к  лактозоположительным колониям вызывает
сомнение у исследователя.
     В этих случаях:
     - проверяют наличие отпечатка на среде Эндо после  снятия  петлей
подозрительной колонии;
     - выполняют оксидазный тест по п. 8.2.3.2;
     - подтверждают принадлежность к Граму по п. 8.2.3.3;
     - подтверждают   способность   к   газообразованию   при   посеве
изолированных  1 - 2 колоний каждого типа с каждого сектора на среду с
лактозой по п. 5.6 с последующей инкубацией посевов при температуре 37
+/- 1 ЬC в течение 24 - 48 ч.
     При отсутствии изолированных колоний  проводят  рассев  на  среду
Эндо общепринятыми бактериологическими методами.
     Отрицательный ответ дают, если:
     - в среде накопления нет признаков роста;
     - на секторах среды Эндо нет роста;
     - на  секторах  среды Эндо выросли не характерные для колиформных
бактерий колонии (прозрачные с неровными краями, расплывчатые и т.п.);
     - все колонии оказались оксидазоположительными;
     - все колонии оказались грамположительными;
     - если  в  подтверждающем  тесте на среде с углеводом не отмечено
газообразования.
     Для определения  термотолерантных колиформных бактерий работают с
секторами  среды  Эндо,  где  выросли  типичные   лактозоположительные
колонии.  Делают  посев  2  -  3  изолированных колоний каждого типа с
каждого сектора в пробирки с любой из лактозных  сред,  приготовленных
по п. 5.6.
     Среду перед посевом нагревают на водяной бане или в термостате до
44  ЬC.  Немедленно  после  посева  пробирки  помещают  в  термостат и
инкубируют при температуре 44 +/- 0,5 ЬC в течение 24  ч.  Допускается
просмотр посевов через 4 - 6 ч.
     При образовании газа в среде  накопления,  росте  на  среде  Эндо
лактозоположительных  бактерий  и  выявлении способности этих бактерий
ферментировать  лактозу  до  кислоты  и  газа  в  течение  24  ч   при
температуре  44  ЬC  дают положительный ответ на наличие в этом объеме
пробы воды ТКБ. Во всех остальных случаях дают отрицательный ответ.
     Допустимо для   ускорения   выдачи   ответа  на  присутствие  ТКБ
производить высев 1 мл  из  объемов  среды  накопления,  где  отмечено
помутнение и газообразование,  в пробирке с лактозо-пептонной средой с
поплавком по п.  5.6 и прогретой предварительно до температуры 44  ЬС.
Посевы  выдерживают  в  термостате  при  температуре  44  +/- 0,5 ЬC в
течение 24 ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.
     8.3.5. Учет результатов
     При исследовании 3  объемов  по  100  мл  результаты  оцениваются
качественно,  и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из 3 объемов
делается запись в протоколе "обнаружены в 100 мл".
     При исследовании   количественным   методом  определяют  наиболее
вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по табл. 1.1 Приложения 1.
     Результат сообщают без доверительного интервала.
     При отрицательном  ответе  на  наличие  ОКБ   и   ТКБ   во   всех
исследованных  объемах  выдают заключение в протоколе "не обнаружены в
100 мл".