Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ".
1.5. Контроль эталонных бактериальных культур
Постановка контроля включает:
- оценку степени диссоциации культуры Е. coli М17-02;
- проверку видовых свойств бактериальных культур;
+ R
- проверку способности E.coli К12 F Str , проверку культуры
+ R
E.coli К12 F Str на однородность и отсутствие загрязнения фагом.
1.5.1. Оценка степени диссоциации культуры E.coli М17-02
Из 18-часовой бульонной культуры делают 10-кратные разведения
физиологическим раствором. По 0,1 мл из 5 и 6 разведения засевают на 2
чашки питательного агара, предварительно подсушенные в термостате.
Шпателем посевы распределяют по поверхности агара до полного
исчезновения влаги и инкубируют в термостате при температуре 37 +/- 1
ЬC в течение 18 - 24 ч.
Выбирают чашки, на которых выросло от 30 до 100 колоний.
Проверку тест-штаммов на диссоциацию производят путем визуального
просмотра изолированных колоний на чашках в прямом и косонаправленном
свете через бинокулярную лупу или микроскоп на малом увеличении.
На питательном агаре бактерии вида E.coli образуют колонии
средней величины 3 - 5 мм, плоско-выпуклые, круглые, гладкие с ровным
краем (S-форма), влажные, блестящие, прозрачные в прямом и
непрозрачные (опалово-мутные) в косопроходящем свете. В косопроходящем
свете колонии эшерихий могут иметь равномерную зернистость.
В R-форме колонии эшерихий более плоские, большего размера,
неправильной формы с неровными краями и шероховатой, матовой
поверхностью.
При наличии диссоциации (по размеру, S-R-диссоциация, др.)
подсчитывают количество измененных колоний и общее количество
просмотренных колоний. Общее количество просмотренных бактерий не
должно быть менее 30. Затем рассчитывают процент диссоциации по
формуле:
количество измененных
колоний
% диссоциации = --------------------- x 100%.
общее количество
просмотренных колоний
Если процент диссоциированных колоний более 25%, то данная
культура не пригодна для дальнейшего использования.
1.5.2. Контроль видовых свойств E.coli М17-02 и E.соli К12
+ R
F Str
После восстановления лиофилизированной культуры проводится
типирование культуры по биохимическим свойствам до вида.
Идентификацию рекомендуется проводить с использованием
тест-систем биохимической идентификации семейства Enterobacteriaceae,
разрешенных к применению. При этом следует руководствоваться
рекомендациями производителя. Правомочна постановка отдельных
биохимических тестов.
Перед очередным ежеквартальным созданием запаса рабочей культуры
оценку эталонного штамма E.coli проводят путем подтверждения следующих
основных свойств:
- отсутствие оксидазной активности;
- грам-негативности;
- способности образовывать на среде Эндо характерные
темно-красные (малиновые) колонии с металлическим блеском и отпечатком
на среде;
- способности утилизировать лактозу до кислоты и газа при
температуре 37 ЬC в течение 24 - 48 ч и 44 ЬС в течение 24 ч;
- способности утилизировать глюкозу до кислоты и газа при
температуре 37 ЬC в течение 24 ч.
Если культура не соответствует видовым свойствам, то она не
пригодна для дальнейшего использования.
+ R
1.5.3. Проверка чувствительности E.coli К12 F Str
+ R
Способность E.coli К12 F Str лизироваться специфичным фагом
является основополагающим свойством тест-культуры, на котором основан
метод определения колифагов в воде.
Проверка чувствительности осуществляется каждый раз, когда из
запасов хранения берется новая пробирка с рабочей культурой,
хранящейся на полужидком агаре.
Выполнение анализа
Бактериальную взвесь готовят по п. 8.5.2.3. На 100 мл
расплавленного и остуженного до 45 - 49 ЬC питательного агара вносят 1
мл бактериальной взвеси и разливают в чашки. После застывания чашки на
поверхность агара наносят каплю (0,05 мл) суспензии фага, не
захватывая хлороформа. Инкубируют в течение 18 - 24 ч при 37 ЬC.
Просмотр посевов следует осуществлять в проходящем свете.
Культура считается восприимчивой и пригодной для проведения
анализов воды при наличии четких зон лизиса. При отсутствии зон лизиса
культура не пригодна для использования и подлежит замене.
+ R
1.5.4. Проверка культуры E.coli К12 F Str на загрязненность
фагом
Бактериальную взвесь готовят по п. 8.5.2.3, вносят в
расплавленный и остуженный до температуры 45 - 49 ЬC питательный агар
из расчета 1 мл взвеси на 100 мл агара. Чашку Петри заливают
приготовленной смесью, инкубируют при температуре 37 ЬC 18 - 24 ч.
Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете. Культура должна
давать равномерный газон роста. Наличие зон лизиса в контроле
свидетельствует о загрязненности культуры фагами.
1.5.5. Контроль видовых свойств Pseudomonas aeruginosa и
Pseudomonas fluorescens
Оценку эталонного штамма Pseudomonas aeruginosa и Pseudomonas
fluorescens проводят путем подтверждения следующих свойств:
- наличия оксидазной активности;
- грам-негативности;
- роста на ПБ в виде серебристой пленки на поверхности с
образованием кольца сине-зеленого пигмента;
- наличия сине-зеленого пигмента пиоцианина при росте на ПА при
37 ЬC;
- способности роста на питательном агаре при 42 ЬC в течение 24 ч
(для Pseudomonas aeruginosa);
- способности роста на питательном агаре при 4 ЬС в течение 24 ч
(для Pseudomonas fluorescens).
Если культура не соответствует видовым свойствам, то она не
пригодна для дальнейшего использования.
|
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ".