ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУ 2.3.2.1830-04. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 09.01.04 МУ 2.3.2.1830-04

4.3.1. Определение адгезивности ГММ, штамма-реципиента
             и референтного штамма в отсутствие D-маннозы
     
     Адгезивные свойства ГММ,  штамма-реципиента и контрольного штамма
первоначально   определяются   методом   гемагглютинации   эритроцитов
человека   или  животных  (мыши,  крысы,  кролика,  барана  и  др.)  в
отсутствие D-маннозы (маннозо-чувствительная адгезия).  При этом метод
может выполняться в макро- (пробирках) и микровариантах (планшетах).
     Выполнение метода включает следующие этапы:
     - приготовление взвеси эритроцитов;
     - приготовление суспензии микроорганизма;
     - внесение в пробирки или в лунки планшет взвеси эритроцитов;
     - внесение в пробирки или в лунки планшет суспензии культуры ГММ;
     - аккуратное перемешивание смеси эритроцитов и суспензии культур;
     - инкубация в термостате при 37 град. С в течение 1 часа;
     - предварительный учет результатов;
     - инкубация  смеси  эритроцитов  и  суспензии  микроорганизма при
комнатной температуре в течение 18 часов;
     - окончательный учет результатов.
     Постановка реакции гемагглютинации с  эритроцитами  человека  или
животных включает следующие этапы.
     Приготовление взвеси   эритроцитов.    Из    тщательно    отмытых
эритроцитов  готовят  1%-  ную  взвесь  в  стерильном  физиологическом
растворе.  С этой целью к 1 куб. см эритроцитов, помещенных в 200 куб.
см колбу,  добавляют 99 куб. см стерильного физиологического раствора.
Взвесь аккуратно перемешивают до образования однородной суспензии.
     Приготовление суспензии   ГММ.   ГММ,   выращенный   на   плотной
питательной среде,  смывают  стерильным  физиологическим  раствором  и
                                              9
готовят суспензию клеток в концентрации 1 х 10 КОЕ/куб.  см, используя
стандарты мутности,  выпускаемые ГИСК  им.  Тарасевича,  или  стандарт
McFarlane (N1-7).
     Приготовленную 1%-ную  взвесь  эритроцитов вносят по 1 куб.  см в
пробирки или по 0,1 куб.  см в лунки планшет с U-дном.  Далее в тех же
количествах  вносят  суспензию  ГММ  и  взвесь аккуратно перемешивают.
Пробирки закрывают пробками,  планшет крышкой и помещают  в  термостат
при  температуре,  оптимальной  для  исследуемого вида ГММ,  на 1 час.
После инкубации пробирок или  планшета  в  термостате  их  вынимают  и
проводят  предварительный  учет  результатов.  При  наличии адгезивных
свойств у ГММ эритроциты распределяются равномерно по всей поверхности
дна.  При  отрицательном  результате  все эритроциты собираются в виде
точки в  середине  дна  пробирки  или  лунки  планшета.  Окончательные
результаты  исследования  учитывают  через  18  часов  после инкубации
пробирок или планшета при комнатной температуре.