МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ (ГМИ) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ.. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 06.03.04 МУК 4.2.1902-04

4.1. Приготовление растворов

     Приготовление 1М Трис - HCl (рН 7,5)
     В  мерной  колбе  на  100  мл растворить 12,11 г Трис (оксиметил)
аминометана  (молекулярный  вес  121)  в  80 мл дистиллированной воды,
довести  рН  концентрированной  соляной кислотой до 7,5, затем довести
объем  раствора до метки деионизованной водой, перемешать, хранить при
температуре -20 ёC не более года.
     Приготовление 5М NaCl
     Растворить  29,22  г  натрия хлористого (молекулярный вес 58,5) в
100  мл дистиллированной воды, перемешать, хранить в колбе с притертой
пробкой при комнатной температуре до 1 года.
     Приготовление 30%-ной NaOH
     Растворить  3  г  натрия  гидроокиси (молекулярный вес 40) в 7 мл
дистиллированной воды.
     Приготовление 0,5М ЭДТА (рН 8,0)
     В    мерной    колбе    на    100    мл    растворить   18,62   г
этилендиаминтетрауксусной  кислоты  (молекулярный  вес  372,2) в 80 мл
дистиллированной  воды. Раствором 30%-ной натрия гидроокиси довести рН
раствора  до  8,0,  дистиллированной  водой - объем раствора до метки,
перемешать.   Хранить  в  колбе  с  притертой  пробкой  при  комнатной
температуре до 1 года.
     Приготовленные  растворы  автоклавировать при 1 атм., 121 ёC 15 -
20 мин. или фильтровать через мембраны Millipore 0,4 мкм.
     Приготовление хлороформа, насыщенного водой
     Смешать  100  мл  хлороформа  с  20  мл  деионизированной  воды и
оставить  на 24 ч для насыщения. Срок хранения при температуре от 4 до
5 град.С - не более 6 мес.
     Приготовление 70%-ного раствора этилового ректификованного спирта
     Смешать 70  мл 96%-ного этилового ректификованного спирта с 26 мл
деионизированной воды.  Срок хранения при температуре от 4 до 5 град.С
- не более 2 мес.
     Приготовление раствора БСА (20 мкг/мл)
     Растворить  0,002 г сухого альбумина бычьего сывороточного в 1 мл
деионизированной  воды,  10 мкл полученного раствора смешать с 990 мкл
деионизированной воды.
     Срок хранения в  морозильной  камере  при  температуре  минус  20
град.С - не более 6 мес.
     Приготовление лизирующего буфера (2%-ного "СТАВ")
     Растворить  0,5  г  гексадецилтриметиламмония  бромида  в  10  мл
деионизированной  воды  (при  плохом  растворении подогреть на водяной
бане),  добавить  2,5  мл 1М Трис - HCl, 7 мл 5М NaCl, 1 мл 0,5М ЭДТА,
доводят  объем раствора деионизированной водой до 25 мл, перемешивают.
Срок хранения  при  температуре  от  4  до 5 град.С - не более 6 мес.,
допустимо образование осадка.
     Перед использованием    раствор    выдерживают    при   комнатной
температуре или подогревают в термостате при температуре 65 град.С  до
полного растворения осадка.
     Непосредственно  перед использованием в приготовленный лизирующий
буфер  вносят  меркаптоэтанол  из  расчета  4  куб.  мм  на  1 куб. см
лизирующего буфера и перемешивают.
     При     проведении    электрофореза    использовать    один    из
нижеперечисленных буферов.
     Приготовление 1x ТВЕ буфера для электрофореза
     В  мерной  колбе  на  1000  мл растворить 10,8 г Трис (оксиметил)
аминометана,  5,5  г борной кислоты и 0,92 г этилендиаминтетрауксусной
кислоты,  довести  дистиллированной  водой  до  метки,  перемешать  до
полного  растворения.  Срок  хранения  1x  раствора  - 10 дней, обычно
готовят  10x  и  перед  употреблением  разбавляют  до  1x,  используют
максимум три раза.
     Приготовление 1x ТАЕ буфера для электрофореза
     В  мерную колбу вместимостью 1000 мл внести 242 г Трис-основания,
57,1   мл   ледяной  уксусной  кислоты,  10  мл  0,5  М  ЭДТА,  долить
деионизованной   водой   до   метки.   Полученный  50x  раствор  перед
употреблением   развести   в   50  раз.  Использовать  для  проведения
электрофореза не более двух раз.
     Приготовление раствора бромистого этидия - C21H20N3Br (10 мг/мл)
     Растворить  1 г бромистого этидия в 100 мл дистиллированной воды.
Срок хранения в посуде темного стекла - обязательно при температуре от
4 до 5 град.С - не более 12 мес.
     Приготовление 2%-ного агарозного геля, см. п. 8
     Допускается  хранение готового геля в 1х буфере для электрофореза
в холодильнике при температуре от 4 до 5 град.С - не более 2 сут.