Страницы: 1 2
производят высев бактериологической петлей на две чашки с
висмут-сульфитным агаром (п. 2.4.22). Рассев производят одним из
методов получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют
при температуре 37 град.С в течение 18 - 20 ч.
На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл круглые, черные, с
металлическим блеском, с сероватым металлическим ободком вокруг
колоний, так называемое "зеркало", зеленые с темным центром и без
него, вызывающие потемнение среды под колонией.
При дальнейшей работе с культурами сальмонелл возможно
использование SS-агара (п. 2.4.23). На SS-агаре колонии сальмонелл
вырастают бесцветными. Колонии нежные, гладкие, круглые, слегка
выпуклые с ровными краями, блестящие, полупрозрачные, диаметром 1,0 -
2,0 мм.
В отличие от патогенных бактерий E.coli образуют круглые,
выпуклые, гладкие, малинового цвета колонии.
При обнаружении колоний, подозрительных на сальмонеллы, по 4 - 5
изолированных колоний с каждой чашки снимают для посева в пробирки с
комбинированными средами для определения биохимических свойств,
подтверждающих принадлежность к родам Salmonella (типа Клиглера,
Олькеницкого и др.).
Окончательное определение биохимических и серологических свойств
сероваров проводят по действующим инструкциям.
2.11. Определение кишечных вирусов
При санитарно-вирусологическом контроле воды поверхностных
водоемов проводят концентрирование, детекцию и идентификацию вирусов.
2.11.1. Определение понятия показателя
Кишечные вирусы - вирусы, обитающие или транзиторно проходящие
через желудочно-кишечный тракт, патогенные для человека, вызывающие
заболевания с различной клинической картиной и степенью тяжести. В
настоящее время из группы кишечных вирусов приведенным ниже методом
определяются: энтеровирусы (вирусы полиомиелита 1, 2, 3 типа, вирусы
группы ЕСНО, Коксаки В и некоторые серотипы Коксаки А); ротавирусы,
антигены гепатита А и Е; аденовирусы.
2.11.2. Область применения
Кишечные вирусы в воде поверхностных водоемов рекомендуется
определять:
- при выборе водоисточника;
- при превышении нормативного уровня колифагов;
- в случаях несоответствия качества воды по основным индикаторным
микробиологическим показателям, а также при эпидемической ситуации в
отношении кишечных вирусных инфекций в населенном пункте.
Информация о наличии или отсутствии энтеровирусов позволит
судить:
- о степени риска для здоровья населения при использовании
загрязненной вирусами воды;
- о возможности использования воды поверхностного водоема на
данном участке в качестве источника хозяйственно-питьевого
водоснабжения и в рекреационных целях;
- при проведении эпидемиологических исследований;
- эффективности работы очистных сооружений в отношении вирусного
загрязнения.
2.11.3. Принцип метода
Метод основан на принципе сорбции вирусных частиц
высокоэффективным сорбентом класса кремнеземов - макропористым стеклом
марки МПС 1000 ВГХ и последующей десорбцией их небольшим объемом
элюэнтов. Технологическая особенность метода заключается в том, что
сорбент помещен в водопроницаемый флизелиновый пакет, который опускают
в водный поток, что позволяет:
- исследовать большие объемы воды и тем самым увеличить
вероятность сорбции вирусных частиц;
- избежать механического загрязнения сорбента.
Достоинством использования флизелинового пакета с сорбентом
является:
- высокая сорбционная емкость стекла;
- небольшой объем используемых элюирующих растворов, что
обеспечивает дополнительное концентрирование вирусных частиц.
2.11.4. Подготовка и проведение исследования
2.11.4.1. Приготовление растворов.
Десятикратные концентраты элюирующих растворов готовят на
стерильной дистиллированной воде.
1) 30,3 г триса (Tris [hydroxymethyl]aminomethane) растворяют в
300 - 400 мл воды, доводят значение рН до 9,1 концентрированной НСl и
оставляют на 1 сутки при комнатной температуре. Затем проверяют (и при
необходимости доводят еще раз) значение рН до 9,1. Конечный объем
раствора (500,0 мл) получают добавлением дистиллированной воды.
2) 30,3 г триса + 145 г NaCl на 500,0 мл раствора, рН 9,1.
3) 150,0 г мясного экстракта (Вееf Extract Powder) + 350 мл
трисбуфера, рН 9,1.
Растворы автоклавируют 15 мин. при 1 атмосфере (121 град.С).
Рабочие разведения элюэнтов получают добавлением 9 частей
стерильной дистиллированной воды к 1 части концентрированного
раствора.
2.11.4.2. Подготовка макропористого стекла.
Для повышения сорбционных свойств макропористое стекло,
представляющее собой белый порошок, обрабатывают следующим образом:
1) 1 объем стекла заливают в колбе 1-м объемом смеси (1:1) 3%-ным
р-ром Н2О2 и 6 М НСl и кипятят в вытяжном шкафу в течение 1 ч (без
пробки), соблюдая меры предосторожности. Полученное МПС отмывают
большим количеством дистиллированной воды до нейтрального значения рН
и высушивают при 100 град.С.
2) 1 г подготовленного сорбента помещают в пакет из флизелина
размером 5 x 7 см.
2.11.4.3. Подготовка хроматографической колонки.
Колонки обрабатывают силиконовой жидкостью (Serva) для
предотвращения адсорбции вирусов. Для этого внутреннюю поверхность
колонки смачивают данной силиконовой жидкостью, после чего колонку
выдерживают 1 ч при t = 100 град.С. Силиконовую жидкость можно
использовать многократно.
2.11.4.4. Отбор проб и обработка проб.
Пакет с сорбентом закрепляют с помощью лески так, чтобы он
оказался в потоке воды. После экспозиции в течение 3 - 7 суток пакет
вынимают, помещают в новый полиэтиленовый мешочек и стерильный флакон
и транспортируют в лабораторию в сумке-холодильнике. Каждую пробу
маркируют с указанием населенного пункта, точки отбора, даты установки
и времени экспозиции пакета. Материал доставляют в лабораторию в
максимально короткий срок (не более 6 ч). Доставленные в лабораторию
пробы регистрируют в рабочем журнале.
До проведения элюции вирусов пакеты в полиэтиленовом мешке или
стерильном флаконе можно хранить в холодильнике при 4 град.С не более
1 суток.
В лаборатории пакет с сорбентом извлекают из транспортировочной
емкости и помещают в стерильную чашку Петри. Обрезают край пакета,
вымывают стекло стерильной дистиллированной водой (~ 5 мл) с помощью
пипетки в эту же чашку Петри и переносят пипеткой или через воронку в
колонку объемом 5 - 10 мл. Вирусы элюируют последовательно 3 рабочими
растворами элюэнтов по 3,0 мл каждый (рабочие разведения элюэнтов - п.
2.11.4.1), собирая их в отдельные пенициллиновые флаконы.
В тех случаях, когда дальнейшие вирусологические исследования
проводят на культуре клеток, полученные элюаты обрабатывают
хлороформом и антибиотиками для удаления бактериальной флоры. Для
этого к 1 объему элюата добавляют 1 объем хлороформа, интенсивно
встряхивают 5 - 10 мин. и центрифугируют 10 мин. при 2000 об./мин. для
разделения фракций. Водную фракцию (верхнюю) аккуратно отбирают
пипеткой в стерильный флакон и добавляют 1000 ЕД пенициллина
(бензилпенициллина натриевую соль) и 10,0 мг сульфата стрептомицина.
Обработанные элюаты до заражения культур ткани можно хранить при 4
град.С в течение 3-х суток. При температуре -20 град.С элюаты можно
хранить в течение 1 года. В случае необходимости многократного
исследования элюаты делят на несколько порций, чтобы избежать
повторного замораживания.
Исследования полученных элюатов на наличие энтеровирусов на
культуре ткани рекомендуется проводить в соответствии с "Руководством
по вирусологическим исследованиям на полиомиелит" (ВОЗ, 1998).
3. Санитарно-паразитологические исследования
3.1. Отбор, хранение и транспортирование проб
Отбор проб из поверхностных источников питьевого водоснабжения по
количеству и кратности проводят в соответствии с СанПиН 2.1.5.980-00
"Гигиенические требования к охране поверхностных вод".
Отбор проб воды производят в чистые емкости. Сосуды больших
объемов - молочные фляги, металлические и пластмассовые ведра и т.п.,
которые тщательно промывают кипяченой водой и ополаскивают отбираемой
для анализа водой.
Пробы воды необходимо брать в створах, расположенных выше и ниже
сброса стоков, у причалов, мест стоянок пассажирских и грузовых судов,
выше и ниже населенных мест, в зонах рекреации, оздоровительных
детских, спортивных и военных лагерей, по берегам и в середине
водоема. Пробы отбирают с поверхности водоема, а также с различных
глубин, начиная с 10 - 15 см от поверхности воды или от нижней кромки
льда. Глубинные пробы можно отбирать с помощью пробоотборника
гидробиологического типа "Пробоконг", снабженного погружным насосом, в
соответствии с инструкцией по применению или другого с аналогичными
характеристиками, разрешенного к применению в установленном порядке.
Пробы воды с поверхности водоема следует отбирать емкостями 1,5 -
2,0 л с интервалами 3 - 5 мин. Это позволяет в течение 40 - 60 мин.
взять усредненную пробу объемом 25 л.
Пробы воды могут доставляться в лабораторию без обработки или, в
целях облегчения их транспортирования, после предварительной обработки
(концентрирования материала путем фильтрования на месте отбора проб, в
лаборатории водопроводной станции и др., с использованием прибора типа
ПВФ - 142 полевая модификация).
С этой же целью может быть использована методика первичной
концентрации паразитарных патогенов с помощью таких коагулянтов, как
сульфат аммония, сульфат железа, сульфат меди в дозе 0,1 - 0,3 г/л.
В пробу воды на месте отбора добавляют коагулянт, затем тщательно
перемешивают и отстаивают 1 - 2 ч. После этого надосадочную жидкость
удаляют, а осадок переносят в сосуд объемом 1 л и доставляют в
лабораторию. Содержимое этого сосуда вновь отстаивают 1 - 2 ч, а
осадок после удаления надосадочной жидкости переносят в центрифужные
пробирки 10 - 50 мл (в зависимости от объема осадка) и центрифугируют
в течение 5 мин. при 1500 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, а к
осадку добавляют 3 мл 1%-ного раствора хлористо-водородной кислоты для
растворения хлопьев коагулянта, перемешивают и центрифугируют в таком
же режиме. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок обрабатывают по
нижеописанной методике.
Пробы, не прошедшие предварительную обработку, хранят при
температуре 15 - 20 град.С не более двух суток.
В случае, если первичная обработка пробы воды (фильтрование)
проводилась вне лаборатории, использованные фильтры помещают в
широкогорлый флакон или стеклянную банку, добавляют 30 - 50 мл
исходной воды; закрывают флакон или банку завинчивающейся или
притертой крышкой, маркируют, указывают дату, место отбора, количество
профильтрованной воды и транспортируют в лабораторию для дальнейшего
исследования. При невозможности исследования в день отбора материал
хранят при 4 град.С не более суток; при отсутствии необходимости
определения жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов
материал хранят при 4 град.С не более 3 - 4 суток после добавления в
него формальдегида с таким расчетом, чтобы концентрация его в
суспензии составила 2%.
3.2. Методики санитарно-паразитологического исследования
воды поверхностных водоемов
Методики предназначены для обнаружения в воде цист патогенных
простейших кишечника (лямблий, криптоспоридий, амебы дизентерийной,
балантидия) и яиц гельминтов, представляющих непосредственную угрозу
для здоровья человека при их заглатывании, при осуществлении контроля
качества воды по паразитологическим показателям в источниках
хозяйственно-питьевого водоснабжения и в водоемах рекреационного
назначения.
3.2.1. Принцип методик с использованием флотантов
Цисты патогенных простейших кишечника и яйца гельминтов
обнаруживаются при микроскопическом исследовании осадка, получаемого
после центрифугирования не менее 4-кратно разведенного раствора
флотанта с плотностью 1,26, в который искомые паразитарные агенты
попадают из осадка, смываемого с мембранных фильтров после фильтрации
через них исследуемой воды. Осаждение цист простейших и яиц гельминтов
происходит за счет резкого снижения плотности флотанта, которая после
разведения достигает 1,03 и менее, что ниже плотности паразитарных
агентов.
3.3. Флотационный метод исследования воды
Оборудование:
- прибор для фильтрования типа ПВФ-142, ПМФ-70, УППВ;
- мембранные фильтры типа МФАС-СПА с размерами пор 1,5 - 3,0 мкм,
МФАС-СПА-4 с размерами пор 2,4 - 4,5 мкм, прозрачные АТМ с размерами
пор 1,0 - 3,05; префильтры - капроновая сетка с ячейками 60 - 70 мкм;
- лотки, эмалированные кастрюли или ведра, акварельные кисточки,
пинцеты.
Примечание. Допускается к использованию оборудование с
аналогичными характеристиками, разрешенное к применению для этих целей
в установленном порядке.
Химреактивы:
- 33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка (ZnSO4 x
7H2O):
331 г ZnSO4 x 7H2О растворить в 1 л кипящей дистиллированной
воды. После охлаждения до комнатной температуры измерить удельную
плотность ареометром, которая должна быть не менее 1,25 - 1,26;
- или 30%-ный водный раствор сахарозы: 300 г сахарозы растворяют
в 1 л горячей дистиллированной воды;
- 1%-ный раствор Люголя;
- 6 - 8%-ный раствор формалина;
- дистиллированная вода.
Ход исследования.
Пробу воды фильтруют через мембранные фильтры типа МФАС-СПА или
прозрачные аналитические трековые мембраны (АТМ) в соответствии с
инструкцией.
Весь полученный смыв с мембранных фильтров или после концентрации
химреактивами центрифугируют в пробирках емкостью 10 мл и более в
течение 5 мин. при 1500 об./мин.
Надосадочную жидкость осторожно сливают.
Добавляют 6 - 8 мл 2%-ного водного раствора формалина (или
дистиллированной воды) и размешивают.
Суспензию вновь центрифугируют в течение 5 мин. при 1500 об./мин.
Надосадочную жидкость осторожно сливают или отсасывают пипеткой.
К осадку добавляют 3 мл одного из флотантов с удельным весом не
менее 1,26 (33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка или
30%-ный водный раствор сахарозы и т.п.) и тщательно перемешивают
стеклянной палочкой.
Центрифугируют в течение 5 мин. при 2000 об./мин. или 10 мин. при
1500 об./мин.
Надосадочную жидкость осторожно сливают или отсасывают пипеткой и
переносят в центрифужную пробирку, разбавляя в 4 раза дистиллированной
водой, и центрифугируют в течение 5 мин. при 1500 об./мин.
Надосадочную жидкость осторожно сливают. Из осадка готовят
препараты на предметных стеклах и микроскопируют под покровным стеклом
при увеличении: объектив 10х - 40х, окуляр 10х. Для исследования на
цисты лямблий микропрепараты окрашивают раствором Люголя.
При микроскопии и идентификации паразитарные патогены в пробах
воды необходимо дифференцировать от фитопланктона и гидробионтов.
3.4. Метод санитарно-паразитологического исследования воды
с применением прозрачных аналитических трековых мембран
3.4.1. Характеристика аналитических трековых мембран
Аналитическая трековая мембрана (далее по тексту - трековая
мембрана) из тонкой прозрачной полиэтилентерефталатной пленки со
сквозными порами диаметром от 0,1 до 5 мкм.
Выпускаются диски мембран диаметром 25; 37; 47; 70; 142 мм в
соответствии с используемыми в лаборатории фильтровальными приборами.
При первичном использовании трековых мембран их микроскопируют до
фильтрации, чтобы ознакомиться с формой и расположением пор.
Для фиксации диска трековой мембраны (или его фрагмента) на
поверхность предметного стекла наносят 1 - 2 капли 50%-ного раствора
глицерина. Затем сверху накладывают трековую мембрану или ее фрагмент
в виде полоски (размером с предметное стекло) и накрывают покровным
стеклом. Микроскопируют при увеличениях: окуляр 7х, 10х; объектив 10х,
40х.
На трековой мембране будут хорошо видны сквозные поры в виде
круглых образований с ровными краями, без содержимого (напоминают
пузырьки).
Дифференцировка пор трековой мембраны с паразитологическими
объектами не представляет затруднений, т.к. размеры яиц гельминтов в
10 - 20 раз, а цист лямблий в 2 - 4 раза превышают размеры пор. Поры
трековых мембран имеют четкие контуры, не имеют внутреннего
содержимого и при микроскопии занимают все поля зрения.
3.4.2. Подготовка трековых мембран к фильтрации
Трековую мембрану (которая находится между бумажными
прокладочными дисками, изготовленными из силиконизированной бумаги)
извлекают пинцетом из заводской упаковки и помещают на фритту
фильтродержателя прибора для фильтрования (диаметр диска трековой
мембраны подбирают в зависимости от имеющейся в лаборатории
фильтровальной установки), закрепляют крышкой или в корпусе и проводят
фильтрование пробы воды в соответствии с инструкцией к прибору.
При фильтрации мутной, с видимыми загрязнениями воды необходимо
использовать предфильтры (прилагаемые к прибору для фильтрования или к
набору аналитических трековых мембран).
3.4.3. Подготовка и микроскопия аналитических
трековых мембран
После фильтрования пробы воды трековую мембрану извлекают
пинцетом, помещают в чашку Петри или эмалированный лоток поверхностью,
которая прилегала к фритте.
Затем, придерживая трековую мембрану за края пинцетом, не задевая
поверхности фильтрации во избежание нарушения целостности препарата и
потери искомых патогенов, разрезают ее на отдельные полоски, размер
которых соответствует размеру предметного стекла. Диски трековых
мембран диаметром 25; 37; 47 мм можно микроскопировать на больших
предметных стеклах, не разрезая их на части.
Полоску трековой мембраны поверхностью, которая прилегала к
фритте, помещают на предметное стекло, предварительно обработав его
50%-ным раствором глицерина (для этого на поверхность предметного
стекла наносят 1 - 2 капли 50%-ного раствора глицерина и стеклянной
палочкой распределяют по всей поверхности). Всю поверхность полоски
трековой мембраны накрывают сверху покровными стеклами (24 x 24 мм).
Микроскопируют при увеличениях: окуляр 7х или 10х; объектив 10х; 40х.
При исследовании на цисты лямблии на полоску трековой мембраны,
которая уже помещена на предметное стекло с глицерином, наносят сверху
каплю 1%-ного раствора Люголя (пропись см. в приложении 13) <*> и
накрывают покровными стеклами (24 x 24 мм) всю поверхность полоски.
Микроскопируют при увеличениях: окуляр 7х или 10х, объектив 40х.
------------------------------------
<*> Приложения 11 - 13 не приводятся.
Использование прозрачных аналитических трековых мембран облегчает
санитарно-паразитологический анализ воды и значительно сокращает время
его проведения. Их использование может проходить по двум вариантам:
1-й вариант - трековые мембраны применяют при пробоподготовке
воды и выполнении вышеописанной стандартной методики в соответствии с
МУК 4.2.964-00 "Санитарно-паразитологические исследования воды
хозяйственного и питьевого использования".
2-й вариант - отфильтрованный с помощью трековой мембраны осадок
непосредственно микроскопируют на ней в соответствии с Методическими
рекомендациями Минздрава России N 22 ФЦ/3314 от 26.03.03
"Использование прозрачных аналитических трековых мембран для
санитарно-паразитологических исследований воды" (п. 2.1.2).
Примечание. При использовании трековых мембран на приборах
вакуумного фильтрования (ПВФ-142 и др.) необходимо учитывать, что
толщина диска трековой мембраны меньше стандартных мембранных фильтров
МФАС-СПА, что может послужить причиной отсутствия вакуума.
Для избежания погрешности, перед укладкой диска трековой мембраны
на фритту, по краю фильтродержателя укладывают (в соответствии с
инструкцией) уплотнительные кольца, которые прилагаются к каждой
стандартной заводской упаковке трековых мембран.
3.5. Методика санитарно-паразитологического исследования
воды на наличие ооцист криптоспоридий
Методика предназначена для обнаружения в воде ооцист
криптоспоридий, а также может использоваться и для определения цист
лямблий и яиц гельминтов.
3.5.1. Исследование воды методом последовательной
фильтрации через систему аналитических трековых
мембранных фильтров (АТМ)
Оборудование и инструментарий:
- прозрачные аналитические трековые мембраны (АТМ) с диаметром
пор 5,0 и 2,5 мкм и капроновая сетка (префильтр) с диаметром пор 25,0;
- префильтр (капроновая сетка) с диаметром пор 67 - 70 мкм;
- прибор для фильтрования типа ПВФ-142; ПВФ-35; ПНФ-70;
- пинцеты, кисточки акварельные (широкие, мягкие или
полужесткие), пластмассовые пластины, лотки, эмалированные кастрюли
или ведра.
Химреактивы:
- краска по Циль-Нильсену: фуксин основной 2 г растворить в 12 мл
спирта 96%; фенола 5 г растворить в 50 мл дистиллированной воды; слить
вместе растворы фуксина и фенола, долить дистиллированной воды до 100
мл и тщательно перемешать;
- дистиллированная вода.
3.5.2. Ход исследования на цисты лямблий, яйца
и личинки гельминтов
Предварительно на заборное устройство прибора для фильтрования
ПВФ-142 крепится префильтр в виде капроновой сетки с размерами ячейки
67 - 70 мкм (поставляется в комплекте с АТМ).
Аналитическую трековую мембрану (АТМ) с диаметром пор 5,0 мкм
помещают на фритту <*> фильтродержателя прибора для фильтрования и
сверху укладывают фильтр с размером пор 25,0 мкм, уплотняют кольцом из
эластичной резины. Далее закрепляют крышкой и проводят фильтрацию в
соответствии с инструкцией к прибору. Необходимо профильтровывать
пробу воды в отдельную емкость, т.к. она будет подвергаться повторной
фильтрации.
После фильтрации обе мембраны последовательно по одной осторожно
снимают пинцетом с фритты на заранее подготовленные тонкие
пластмассовые квадратные пластинки размером 150 x 150 кв. мм
(поставляются в комплекте с АТМ) и переносят в лоток.
Профильтрованную в отдельную емкость пробу воды повторно
фильтруют с использованием АТМ с диаметром пор 2,5 мкм, которую
укладывают на фритту <*> фильтродержателя между двумя уплотнительными
кольцами из полиэтилена или обрезиненного лавсана (поставляются в
комплекте с АТМ).
------------------------------------
<*> Для плотного (без складок) прилегания АТМ к фритте
рекомендуется:
а) АТМ вместе с калькой уложить мембраной на фритту и провести
ладонью несколько раз по кальке. За счет появления электростатики
мембрана прилипнет к фритте, а калька легко отделится от мембраны;
б) смочить фритту и мембрану дистиллированной водой и плотно
уложить АТМ на фритту без кальки.
После фильтрации АТМ осторожно снимают пинцетом с фритты на
заранее подготовленные тонкие пластмассовые квадратные пластинки
размером 150 x 150 кв. мм (поставляются в комплекте с АТМ) и переносят
в лоток.
Со всех трех фильтров аккуратно и тщательно, придерживая диск с
мембраной пинцетом за край, производят смыв осадка с обеих
поверхностей мембран и с пластиковых дисков, на которых эти фильтры
лежали. Смыв проводят плоской, средней жесткости кисточкой
(поставляемой в комплекте с АТМ) в лоток с дистиллированной водой. При
этом периодически споласкивают мембраны и диски дистиллированной водой
из химического стакана. Общий объем дистиллированной воды при смыве
осадка со всех 3 фильтров не должен превышать 300 - 500 мл.
Концентрированный смыв сливают из лотка в воронки прибора для
фильтрации типа ПВФ-35 или ПВФ-47 и фильтруют через АТМ с диаметром
пор 2,5 мкм. В зависимости от первоначальной загрязненности воды
используют 1 - 2 или 3 воронки. Если прибор с одной воронкой, то
фильтруют последовательно, меняя мембраны.
После фильтрации АТМ осторожно снимают пинцетом и переносят на
предметное стекло, предварительно обработав его 50%-ным раствором
глицерина (для этого на поверхность предметного стекла наносят 1 - 2
капли 50%-ного раствора глицерина и стеклянной палочкой распределяют
по всей поверхности), затем сверху мембраны наносят каплю 1% раствора
Люголя и накрывают покровным стеклом (24 x 24 мм) всю поверхность
мембраны.
Микроскопируют при увеличениях: окуляр 7х или 10х; объектив 10х;
для идентификации яиц гельминтов и исследования на цисты лямблий -
объектив 40х.
3.5.3. Ход исследования на ооцисты криптоспоридий
После проведения фильтрации через АТМ с диаметром пор 2,5 мкм на
приборе типа ПВФ-35 или ПВФ-47 полученного концентрированного 1 смыва
мембрану(ы) тщательно высушивают в лотке на воздухе.
Затем окрашивают АТМ в кювете (лотке, чашке Петри) карболовым
фуксином (краска по Циль-Нильсену) в течение 20 мин.
После окраски фильтры промывают под проточной водой,
предварительно закрепив АТМ за край химического стакана, с таким
расчетом, чтобы струя воды не попадала на поверхность мембраны, а
закрепленный фильтр свободно плавал в воде. Фильтр считается промытым,
когда из стакана польется прозрачная вода.
Затем обесцвечивают (дифференцируют) 5 - 10%-ной серной кислотой
в течение 10 - 20 с и снова промывают под проточной водой,
предварительно закрепив АТМ за край химического стакана, с таким
расчетом, чтобы струя воды не попадала на поверхность мембраны, а
закрепленный фильтр свободно плавал в воде. Фильтр считается промытым,
когда из стакана польется прозрачная вода.
Затем дополнительно окрашивают 0,2%-ным водным раствором
метиленового синего или 5% малахитовой зелени в 10% этиловом спирте в
течение 3 - 5 мин. (при отсутствии этих ингредиентов этот этап можно
исключить). Промывают под струей проточной воды, предварительно
закрепив АТМ за край химического стакана, с таким расчетом, чтобы
струя воды не попадала на поверхность мембраны, а закрепленный фильтр
свободно плавал в воде. Фильтр считается промытым, когда из стакана
польется прозрачная вода.
Пинцетом фильтр из воды переносят в кювет (лоток, чашку Петри) и
тщательно высушивают на воздухе.
Окрашенный фильтр (АТМ) помещают на предметное стекло,
предварительно смазанное иммерсионным маслом (для лучшей адгезии),
накрывают покровным стеклом и микроскопируют под иммерсией при
увеличении микроскопа: окуляр 10х, объектив 90х или 100х.
Результат окрашивания.
Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки
ярко-красного (малинового, вишневого) цвета и имеют вид округлых
образований диаметром 5 - 6 микрон с отчетливо видимой оболочкой и
структурированным содержанием (можно наблюдать наличие 4
веретенообразных темноокрашенных спорозоитов) на синем или зеленом
основном фоне.
Примечание. Для определения в воде цист лямблий и ооцист
криптоспоридий при наличии в лабораториях специального оборудования,
иммунореагентов, химреактивов может быть использован метод
иммуномагнитной сепарации с флуорохромами.
3.6. Идентификация выявленных возбудителей кишечных
паразитарных болезней
При микроскопировании подсчитывают число паразитарных патогенов
во всем объеме осадка, что соответствует их числу во всей
исследованной пробе. Одновременно определяют систематическую
принадлежность обнаруживаемых паразитических организмов; идентификация
их проводится по следующим признакам.
Цисты лямблий - овальная форма, размеры 10 - 14 мк в длину и 6 -
10 мк в ширину; незрелые цисты содержат 2 ядра, зрелые - 4; ядра
находятся у переднего полюса цисты. Оболочка цисты отчетливо выражена
и большей частью отстает от протоплазмы, что является одним из
характерных отличий цист лямблий от цист других простейших. Внутри
цисты вдоль по средней линии проходят две опорные нити - аксостили; в
косом или поперечном направлении лежат характерные парабазальные тела
(2 - в незрелых и 4 - в зрелых цистах), нередко заметен сложно
свернутый жгутиковый аппарат. Плотность - 1,06 - 1,09.
Цисты амебы дизентерийной - округлая, редко овальная форма,
размеры от 10 до 16 мк; молодые цисты содержат 1 - 2 ядра с центрально
расположенной звездчатой кариосомой, зрелые цисты содержат 4 ядра, в
зрелых четырехъядерных и незрелых двухъядерных цистах ядра расположены
в различных плоскостях; оболочка цист двухконтурная в виде светлого
прозрачного ободка. Одноядерные цисты почти всегда содержат в большом
количестве гликоген, который в виде крупной вакуоли с нерезкими
очертаниями занимает обычно больше половины цисты и раствором Люголя
окрашивается в темно-коричневый цвет. Плотность - 1,08 - 1,1.
Следует иметь в виду, что в природной воде могут встречаться
цисты Entamoeba dispar, идентичные цистам дизентерийной амебы, но не
обладающие патогенными свойствами для человека. В этом случае следует
в протоколе исследования отмечать находки без указания видовой
принадлежности таких цист. Для идентификации их необходимы
дополнительные специальные исследования. Однако и в данной ситуации
должна быть настороженность в отношении эпидемического неблагополучия.
Цисты Балантидия кишечного - правильная круглая форма, плотная
двухконтурная оболочка, средний размер около 50 мк. Внутри цист
имеется крупное бобовидное ядро. Протоплазма однородна, гликоген в ней
распылен равномерно. Под оболочкой в некоторых цистах заметно
углубление, представляющее собой редуцированный цитостом - органеллу,
соответствующую началу пищеварительной трубки многоклеточных.
Ресничный покров отсутствует. Плотность - 1,1.
Яйца аскариды человеческой (свиной) - оплодотворенные яйца
овальной или шаровидной формы. Наружная оболочка крупнобугристая,
толстая, коричневого цвета (иногда встречаются яйца без наружной
бугристой оболочки). Размеры яиц 50 - 70 x 40 - 50 мк. Яйцеклетка
мелкозернистая и шаровидная, расположена в центре яйца. Плотность -
1,10 - 1,14.
Зрелое яйцо (способное заразить при заглатывании) содержит внутри
подвижную личинку, свернувшуюся кольцевидно или перекрестно.
Яйца токсокары (аскариды собачьей) - почти круглые, 65 - 75 мк в
диаметре, с нежноячеистой наружной толстой оболочкой темно-коричневого
цвета, внутри яйца видна округлая зародышевая клетка. Зрелые
инвазионные яйца содержат внутри подвижную свернувшуюся кольцом или
перекрестно личинку. Плотность - 1,22.
Яйца власоглава - симметричные, имеют лимонообразную или
бочонковидную форму. Оболочка темно-коричневая, толстая. На обоих
полюсах имеются светлоокрашенные пробковидные образования. Размеры яиц
50 - 54 x 23 - 26 мк. В зрелых инвазионных яйцах видна подвижная
личинка. Плотность - 1,16 - 1,22.
Яйца острицы - асимметричные. Одна сторона заметно уплощена,
другая выпукла. Размеры яиц 50 - 60 x 30 - 32 мк. Оболочка тонкая,
гладкая и бесцветная. Яйца могут быть на различных стадиях созревания,
до головастикоподобной личинки включительно. Плотность - 1,14.
Яйца цепня карликового - оболочка яйца бесцветная, тонкая,
гладкая. Форма овальная. Размер яиц 40 x 50 мк, эмбриофора (зародыш)
почти шаровидная (29 x 30 мк), с длинными нитевидными придатками на
полюсах. Плотность - 1,12.
Онкосферы тениид (цепня свиного и эхинококков) - овальная форма,
размеры 31 - 40 x 20 - 30 мк; имеют тонкую наружную оболочку и толстую
радиально-исчерченную внутреннюю оболочку темно-коричневого цвета.
Внутри онкосферы находится зародыш-эмбриофора с шестью зародышевыми
крючьями. Плотность - 1,24.
Отрицательный результат анализа не гарантирует отсутствия
паразитарных патогенов в пробе, поэтому результат исследования должен
представляться в протоколе термином "не обнаружены". Обнаружение даже
одного экземпляра паразитарных патогенов в 1 пробе питьевой воды
указывает на эпидемическое неблагополучие в системе питьевого
водоснабжения.
3.7. Визуальная оценка вероятной жизнеспособности цист
патогенных простейших кишечника и яиц гельминтов
Оценка вероятной жизнеспособности цист патогенных простейших и
яиц гельминтов визуально проводится по следующим критериям,
подтверждающим жизнеспособность:
- целостность наружной оболочки (отсутствие ее разрывов,
вдавлений, выбухания, сморщивания);
- четкая внутренняя структура цисты или яйца: у цист - четко
видны ядра, отсутствует зернистость. У цист лямблий, кроме того, видны
аксостили, жгутиковый аппарат, медиальное тело. Для яиц гельминтов
(аскарид, токсокар, власоглавов, остриц) характерно наличие дробящейся
зародышевой клетки или подвижной личинки. У живых онкосфер тениид и
карликового цепня зародышевые крючья расположены попарно, а у мертвых
- беспорядочно;
- при окраске препарата 1%-ный водным раствором эозина
жизнеспособные цисты лямблий не воспринимают окраску в течение первых
5 мин., мертвые окрашиваются сразу же в розовый цвет. Поэтому
указанную окраску следует использовать до микроскопии только в том
случае, когда на изучение препарата потребуется не более 5 мин. Часто
просмотр мазка длится 15 - 30 мин., тогда 1%-ный водный эозин можно
вводить аккуратно, не сдвигая препарат, под покровное стекло пипеткой
в точке, где при предварительном просмотре уже обнаружены цисты
лямблий;
- жизнеспособность онкосфер тениид и яиц аскарид, содержащих
личинку, определяют путем окрашивания препарата смесью, содержащей
метиленовый синий (приложение 13). Живые онкосферы тениид, а также
личинки, находящиеся внутри яиц аскарид, не окрашиваются в течение
первых 15 мин. Мертвые окрашиваются сразу в синий цвет;
- жизнеспособность онкосфер тениид можно также определить по
движению зародышей при воздействии на них пищеварительными ферментами.
Для этого исследуемый осадок, содержащий онкосферы, помещают на
часовое стекло в искусственный дуоденальный сок (приложение 13).
Стекло ставят в термостат при 36 - 38 град.С на 4 ч. Живые зародыши
освобождаются от оболочек, а мертвые - нет;
- оболочки жизнеспособных онкосфер растворяются также в
подкисленном пепсине (рН 5 - 6) и в щелочном растворе трипсина (рН 8 -
8,5) через 6 - 8 ч при температуре 38 град.С.
Схема выполнения методики санитарно-паразитологического
исследования воды и изображения определяемых с ее помощью цист
кишечных простейших и яиц гельминтов представлены в приложениях 11,
12, 13.
4. Библиографические данные
1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О
санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24 июля
2000 г. N 554 "Об утверждении Положения о государственной
санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о
государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании".
3. Водный кодекс Российской Федерации от 16 ноября 1995 г.
4. СанПиН 2.1.5.980-00 "Гигиенические требования к охране
поверхностных вод".
5. СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования
к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения.
Контроль качества".
6. СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV
группы патогенности и гельминтами".
7. МУ 2.1.4.1057-01 "Организация внутреннего контроля качества
санитарно-микробиологических исследований воды".
8. МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой
воды".
9. ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб".
10. ГОСТ Р 51593-2000 "Вода питьевая. Отбор проб".
11. ГОСТ 2761-84 "Источники централизованного
хозяйственно-питьевого водоснабжения. Гигиенические, технические
требования и правила выбора".
12. ГОСТ 17.1.5.02-80 "Охрана природы. Гидросфера. Гигиенические
требования к зонам рекреации водных объектов".
13. Методические рекомендации по санитарно-вирусологическому
контролю объектов окружающей среды. М., 1982.
14. Руководство по контролю качества питьевой воды. Т. 1, ВОЗ.
Женева, 1994.
15. Руководство по вирусологическим исследованиям полиомиелита,
ВОЗ. 1998.
Приложения для микробиологических исследований
В Приложениях даны методы определения
санитарно-микробиологических показателей для комплексной оценки
качества воды при выборе новых источников водоснабжения и решении
вопроса при проведении оздоровительных мероприятий или закрытии пляжа
в зонах рекреации в соответствии с требованиями ГОСТ 2761-84
"Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения" и
ГОСТ 17.1.5.02-80 "Охрана природы. Гидросфера. Гигиенические
требования к зонам рекреации водных объектов".
Показатели определяют дополнительно к основным, приведенным в п.
п. 2.7 - 2.11.
Приложение 1
(обязательное)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ЧИСЛА МИКРООРГАНИЗМОВ,
ОБРАЗУЮЩИХ КОЛОНИИ НА ПИТАТЕЛЬНОМ АГАРЕ
1.1. Определение понятия показателя
К общему числу микроорганизмов (ОМЧ) относят мезофильные аэробы и
факультативные анаэробы (МАФАМ), способные образовывать на питательном
агаре колонии, видимые при увеличении в 2 раза при температуре 37
град.С в течение 24 часов (ОМЧ 37 град.С) и при температуре 22 град.С
в течение 72 часов (ОМЧ 22 град.С).
1.2. Значение показателя и область применения
Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в
местах действующих водозаборов централизованного питьевого
водоснабжения, в черте населенных мест, в зонах рекреации, поскольку
уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от
природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.
Однако при выборе нового источника водоснабжения или места
рекреации в воде водоемов дополнительно следует определять:
- число колоний, вырастающих при температуре 37 град.С в течение
24 часов;
- число колоний, вырастающих при температуре 22 град.С в течение
72 часов.
ОМЧ при температуре инкубации 37 град.С - индикаторная группа
микроорганизмов, в числе которых определяют в большей мере аллохтонную
микрофлору, внесенную в водоем в результате антропогенного
загрязнения, в т.ч. фекального.
ОМЧ при температуре инкубации 20 - 22 град.С - индикаторная
группа микроорганизмов, в числе которых, помимо аллохтонной,
определяют водную микрофлору данного водоема (автохтонную).
При температуре 22 град.С как правило вырастает больше
сапрофитных микроорганизмов, чем при температуре 37 град.С.
Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об
интенсивности процесса самоочищения, активными участниками которого
они являются. Эта разница более выражена при завершении процесса
самоочищения (коэффициент соотношения ОМЧ 22 град.С : ОМЧ 37 град.С
равен четырем и выше). В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми
сточными водами численные значения обеих групп близки.
Показатель позволяет получать дополнительную информацию о
санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах
самоочищения.
При производственном контроле исходной воды, поступающей на
сооружения водопроводных станций, определяют ОМЧ 37 град.С с целью
установления эффективности очистки и обеззараживания.
1.3. Выполнение анализа при определении ОМЧ 37 град.С
Из каждой пробы делают посев 1 мл и по 1 мл из одного или двух
разбавлений, выбирая объем воды для посева из расчета, чтобы не менее
чем на 2-х чашках выросло от 20 до 300 колоний. Выбранный объем
засевают в 2-х повторностях.
При исследовании заведомо чистых вод с содержанием сапрофитов до
300 КОЕ в 1 мл делают посевы пробы воды без разбавления по 1 мл в 2
повторностях. При исследовании воды неизвестной степени микробного
загрязнения производят посев 3 - 4-х десятикратных объемов, начиная с
1 мл.
После тщательного перемешивания пробы готовят разбавления (п.
2.5) и немедленно вносят по 1 мл воды из пробы или из соответствующего
разбавления в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки,
заранее промаркированные. Сразу же после внесения воды в каждую чашку
вливают 8 - 10 мл (на чашку диаметром 95 мл) расплавленного и
остуженного до 45 - 46 град.С питательного агара после фламбирования
края посуды, в которой он содержался. Затем быстро смешивают
содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая
образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки.
Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки
оставляют до застывания агара. Целесообразно сохранять расплавленный
агар во время посевов в водяной бане, автоматически поддерживающей
температуру 45 - 49 град.С, или в термостате.
Тонкий слой агара увеличивает эффективность учета сапрофитной
микрофлоры водоемов за счет лучших условий для роста аэробных и
факультативно анаэробных бактерий, преобладающих в водоемах. Колонии
вырастают более крупные, легко подсчитываемые на фоне прозрачного
тонкого слоя агара. Ограничен рост расплывчатых колоний.
Две чашки Петри с посевами одной повторности помещают в термостат
и инкубируют при температуре (37 +/- 1) град.С в течение (24 +/- 2) ч.
Две другие чашки Петри с посевами инкубируют при температуре 20 -
22 град.С в течение (72 +/- 2) ч.
1.4. Учет результатов
После инкубации подсчитывают все выросшие на чашке колонии,
видимые при увеличении в 2 раза. Подсчет следует производить только на
тех чашках, на которых выросли изолированные колонии в количестве от
20 до 300. При посеве 1 мл неразбавленной воды ведут подсчет на чашках
с любым количеством колоний, меньшим 300, и не менее чем на двух
чашках.
Подсчитанное число колоний на каждой чашке суммируют и делят на
объем воды в мл, засеянный на те чашки, на которых производился
подсчет. Результат выражают в числе колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1
мл исследуемой воды, округляя до 2 - 3 значимых чисел.
В протокол анализа заносят результат "число КОЕ ОМЧ 37 град.С в 1
мл" или "число КОЕ ОМЧ 22 град.С в 1 мл".
Результат можно представить на основании подсчета колоний на
одной чашке (с отметкой в протоколе анализа), если на других чашках:
а) рост расплывчатых колоний распространился на всю поверхность
чашки;
б) число колоний превышает 300 - 500;
в) при посеве из разбавлений выросло менее 20 колоний.
Если на всех чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не
распространившийся на всю поверхность, или выросло более 300 колоний и
анализ нельзя повторить, подсчитывают колонии на секторе чашки с
последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе
отмечают "число КОЕ ОМЧ в 1 мл ориентировочно".
Если рост расплывчатых колоний распространился на всю поверхность
чашки и подсчет невозможен, то в протоколе анализа отмечают "ползучий
рост". Если подсчет невозможен из-за слишком многочисленного роста, то
в протоколе записывают "сплошной рост".
В примечании отмечают особые обстоятельства, которые могут
повлиять на результат (превышение срока хранения пробы, изменение
температуры и времени инкубации посевов, отклонения от правил при
учете результатов и т.д.).
Воспроизводимость результатов метода может быть достигнута при
строгом соблюдении деталей техники анализа, а также при использовании
питательного агара одинакового состава. Каждую новую партию агара
проверяют при посеве воды водоемов (по сравнению с предыдущей партией)
в соответствии с МУ 2.1.4.1057-01 "Организация внутреннего контроля
качества санитарно-микробиологических исследований воды", отмечая
кроме числа колоний их размер и скорость образования видимого роста.
Приложение 2
(обязательное)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПОР СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИХ КЛОСТРИДИЙ
2.1. Определение понятия показателя
Судьфитредуцирующие клостридии - спорообразующие анаэробные
палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия до сульфидов
на железосульфитном агаре при температуре 44 град.С в течение 16 - 18
часов.
2.2. Значение показателя
В воде источников централизованного питьевого водоснабжения
клостридии определяют в связи с использованием этого показателя для
оценки эффективности обработки питьевой воды на этапах технологических
процессов, поскольку споры сульфитредуцирующих клостридий являются
более устойчивыми, чем вегетативные клетки бактерий, к воздействию
обеззараживающих агентов, а также неблагоприятных факторов,
действующих на микроорганизмы в воде водоемов.
Общепринятым является представление о том, что клостридии
указывают на давнее фекальное загрязнение. Однако длительность
выживаемости этих споровых микроорганизмов в воде водоемов превышает
таковую сальмонелл, что свидетельствует о наличии у этого показателя
одного из наиболее важных свойств индикаторного микроорганизма.
2.3. Выполнение анализа
Споры сульфитредуцирующих клостридий определяют методом прямого
посева.
Пробу воды (20 - 100) мл перед посевом прогревают на водяной бане
при температуре (75 +/- 5) град.С в течение 15 мин. для исключения
вегетативных форм (время отсчитывают после достижения указанной
температуры).
Железосульфитный агар готовят во флаконах в соответствии с п.
2.4.10 небольшими порциями непосредственно перед посевом (повторному
расплавлению агар не подлежит). В течение посева поддерживают среду
нагретой до 70 - 80 град.С в водяной бане.
Для посева выбирают 2 - 3 объема воды с таким расчетом, чтобы
выросли изолированные колонии, ориентируясь на результаты, полученные
ранее при анализе воды в этой же точке. Посевы вносят в стерильные
пробирки и заливают горячим железосульфитным агаром высоким столбиком.
Агар наливают по стенке пробирки во избежание попадания воздуха.
Немедленно после заливки пробирки опускают в емкости с холодной водой
для создания анаэробных условий в толще агара. После застывания посевы
инкубируют при температуре 44 град.С в течение 18 - 24 ч.
Учет результатов - в соответствии с МУК 4.2.1018-00
"Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".
Приложение 3
(обязательное)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ESHERICHIA COLI МЕТОДОМ МЕМБРАННОЙ ФИЛЬТРАЦИИ
3.1. Определение понятия показателя
Esherichia coli (преимущественно Е.coli) - индикаторная группа
бактерий, включает такие термотолерантные колиформы, которые помимо
ферментации лактозы при температуре 44 град.С образуют индол из
триптофана.
3.2. Значение показателя и область применения
E.coli - определяют дополнительно при выборе источника
водоснабжения, для оценки качества воды поверхностных водоемов с целью
расшифровки характера и происхождения микробного загрязнения,
превышающего норматив. При оценке полученных данных имеет значение
число E.coli в воде и их соотношение с числом ОКБ.
Наличие в воде Е.coli свыше 100 КОЕ в 100 мл свидетельствует о
недавнем поступлении фекального загрязнения, о незавершенных процессах
самоочищения, о несоблюдении требований к очистке сточных вод и т.п. В
этих случаях соотношение числа колиформных бактерий и Е.coli, как
правило, менее 10 и водопользование из такого водоема представляет
потенциальную эпидемическую опасность.
3.3. Выполнение анализа
Для определения числа Е.соli используют посевы, которые сделаны
на мембранных фильтрах для проведения анализа на ОКБ.
На фильтрах, где выросли изолированные колонии, подсчитывают
темно-красные колонии с металлическим блеском. Каждую колонию при
росте до 10 - 15 КОЕ или по 3 - 4 колонии каждого подсчитанного типа
подтверждают на принадлежность к Е.coli. Одновременно с пересевом в
среду с лактозой в соответствии с п. 2.4.7 для подтверждения
термотолерантных свойств эту же колонию пересевают в пробирку со
средой, содержащей триптофан (п. 2.4.25), для определения образования
индола. Обе среды перед посевом должны быть прогреты до температуры 44
- 45 град.С и немедленно перенесены в термостат для инкубации при
температуре (44 +/- 0,5) град.С в течение 24 ч. Образование кислоты и
газа в среде с лактозой подтверждает наличие ТКБ.
Продукцию индола определяют одним из общепринятых методов (с
помощью индикаторных бумажек (п. 2.4.24) или с реактивами Эрлиха,
Ковача (п. 2.4.26) и др.). Положительный ответ на наличие Е.coli дают
при ферментации лактозы до кислоты и газа при температуре 44 град.С и
при образовании индола.
Для упрощения анализа тест на образование индола можно заменить
посевом в лактозный бульон с борной кислотой (п. 2.4.8), прогретый до
температуры 44 - 45 град.С, с последующей инкубацией при температуре
(44 +/- 0,5) град.С в течение 24 часов. Положительный ответ на Е.coli
дают при помутнении и газообразовании.
Типичные оксидазоотрицательные колонии учитывают как Е.coli при
ферментации лактозы до кислоты и газа при температуре 44 град.С и
образовании индола из триптофана или при ферментации лактозы в среде с
борной кислотой до образования газа при температуре 44 град.С.
Приложение 4
(обязательное)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ESCHERICHIA COLI ТИТРАЦИОННЫМ МЕТОДОМ
Если в посевах в среду накопления обнаружен газ, а при высеве на
среду Эндо выросли темно-красные колонии с металлическим блеском, то
одновременно подтверждают наличие ТКБ и Е.coli, для чего по 2 - 3
типичные колонии с каждого сектора засевают параллельно в две
пробирки: с лактозной средой по п. 2.4.7 и со средой, содержащей
триптофан (п. 2.4.25), для установления способности ферментировать
лактозу до кислоты и газа при температуре 44 град.С и продуцировать
индол.
Посев производят в среды, прогретые до температуры 44 - 45
град.С, немедленно переносят в термостат и инкубируют при температуре
(44 +/- 0,5) град.С в течение 24 часов.
Продукцию индола определяют одним из общепринятых методов (с
помощью индикаторных бумажек (п. 2.4.24) или с реактивом Ковача (п.
2.4.26)). Положительный ответ дают при наличии кислоты и газа в
лактозной среде и при образовании индола.
Вместо среды, содержащей триптофан, можно сделать посев в
лактозный бульон с борной кислотой (п. 2.4.8), соблюдая описанные выше
условия посева и инкубации. Положительный ответ на наличие в среде
накопления Е.coli дают при помутнении и образовании газа. При
использовании этой среды индол не определяют.
Приложение 5
(обязательное)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОКОККОВ МЕТОДОМ МЕМБРАННОЙ ФИЛЬТРАЦИИ
5.1. Определение понятия показателя
Энтерококки - грамположительные, каталазоотрицательные,
полиморфные, круглые, чаще слегка вытянутые с заостренными концами
кокки, располагающиеся попарно или в коротких цепочках, способные
расти на питательных средах с 0,04% азида натрия, а также устойчивые
при развитии к тестам Шермана (повышенной температуре 45 град.С,
щелочности рН 9,6, содержанию 40% желчи и 6,5% натрия хлористого). К
группе энтерококков относят Enterococcus faecalis, который имеет
основное индикаторное значение, Enterococcus faecium и Enterococcus
durans.
5.2. Значение показателя и область применения
Энтерококки определяют в качестве дополнительного показателя при
выборе нового источника централизованного водоснабжения. В воде
действующих источников водоснабжения и в местах рекреации этот
показатель используют для подтверждения фекального характера
загрязнения. Энтерококки рекомендуется определять при превышающем
нормативы уровне общих колиформных бактерий и при этом низком числе
Е.coli (менее 50 - 100 в 100 мл воды), а также в случаях
несоответствия оценки качества воды по основным показателям и
санитарной ситуации на водных объектах.
При числе энтерококков свыше 50 в 100 мл предполагается
поступление свежего фекального загрязнения и потенциальная
эпидемическая опасность.
5.3. Выполнение анализа
Объем испытуемой воды для посева выбирают с таким расчетом, чтобы
не менее чем на 2-х фильтрах выросли изолированные колонии в
количестве от 5 до 50 при диаметре фильтра 35 мм и от 10 до 100 при
диаметре фильтра 47 мм.
При этом можно ориентироваться на результаты предыдущих
исследований воды в этом же месте водоема и на рекомендации таблицы
Приложения 9.
При исследовании воды неизвестного качества количество засеваемых
десятикратных объемов увеличивают до 3 - 4.
Отмеренный объем воды фильтруют через мембранные фильтры, как это
описано в п. 2.6.
Фильтры с посевами помещают на азидную среду (п. 2.4.14) и
инкубируют при температуре (37 +/- 1) град.С в течение 48 ч.
Для учета выбирают фильтры, на которых выросло число колоний,
указанное выше.
Подсчитывают колонии, характерные для энтерококков: выпуклые, с
ровными краями, темно-малиновые, розовые, светло-розовые, равномерно
окрашенные или с темно-красным нечетко оформленным центром.
Очень мелкие (на пределе видимости невооруженным глазом), плоские
разных оттенков, ярко-малиновые с четко выраженным центром и
бесцветным ободком колонии не учитывают. Дифференциацию энтерококков
от посторонней микрофлоры можно проводить по морфологии колоний под
бинокулярной лупой.
При необходимости подтвердить наличие энтерококков по 2 - 3
колонии каждого типа:
- микроскопируют после окраски по Граму (МУК 4.2.1018-01) и при
обнаружении в мазках грамположительных, как правило, слегка вытянутых
с заостренными концами диплококков, дают положительный ответ;
- пересевают секторами на солевой агар с ТТХ (п. 2.4.15) и после
24 - 48 ч инкубации посевов при температуре 37 град.С энтерококки на
среде дают равномерный нежный рост на протяжении всего штриха. Иные
бактерии на этой подтверждающей среде не растут;
- выполняют каталазный тест, нанося петлей культуру на предметное
стекло. После подсушивания на воздухе добавляют каплю
свежеприготовленной 3%-ной перекиси водорода, прикрывают покровным
стеклом. При отсутствии пузырьков газа - каталазоотрицательный тест.
Контрольная каталазоположительная культура - любой вид стафилококков.
5.4. Учет результатов
Подсчитывают число колоний энтерококков на фильтрах, где выросло
менее 50 - 70 колоний, суммируют и определяют по формуле:
a x 100
X = -------,
V
где:
X - число КОЕ энтерококков в 100 мл исследуемой воды;
a - число подсчитанных энтерококков в сумме;
V - объем воды, профильтрованный через фильтры, на которых велся
учет.
В протоколе исследования выдают "число КОЕ энтерококков в 100
мл".
Приложение 6
(обязательное)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОКОККОВ ТИТРАЦИОННЫМ МЕТОДОМ
6.1. Выполнение анализа
Объем воды выбирают с таким расчетом, чтобы в минимальных объемах
или разбавлениях получить один или несколько отрицательных
результатов. При этом следует ориентироваться на результаты предыдущих
анализов воды в этом же месте водоема и на рекомендации табл.
Приложения 10.
Каждый объем воды или ее разбавление засевают параллельно в 2 или
3 порции щелочно-полимиксиновой среды (ЩЭС) в соответствии с п.
2.4.11. Объемы 100, 50 и 10 мл засевают в равные объемы среды двойной
концентрации. 1 мл исследуемой воды или ее разбавления засевают в 5 мл
среды нормальной концентрации. Посевы инкубируют при температуре (37
+/- 1) град.С.
Через 24 ч производят предварительный учет. Из посевов, где
отмечены признаки роста (помутнение или помутнение и изменение цвета
среды), высевают на 4 - 6 секторов одной из плотных питательных сред -
молочно-ингибиторной (п. 2.4.12), энтерококкагар или азидной (п.
2.4.14). Порции среды, в которых признаки роста отсутствуют, оставляют
при температуре 37 град.С еще на 24 ч, после чего из сосудов, в
которых дополнительно появилось помутнение и изменение цвета среды,
делают высев на сектора одной из перечисленных выше плотных
питательных сред.
Через 24 - 48 ч инкубации посевов на молочно-ингибиторной среде
при температуре (37 +/- 1) град.С в качестве положительных результатов
отмечают наличие аспидно-черных, выпуклых с металлическим блеском
(Enterococcus faecalis), а также сероватых мелких колоний
(Еnterococcus faecium, Еnterococcus durans).
При высеве на сектора азидной среды учет энтерококков после
инкубации посевов проводят в соответствии с п. 5.3.
В сомнительных случаях убедиться в наличии на секторах
энтерококков можно путем посева на солевой агар с ТТХ в соответствии с
п. 2.4.15, микроскопии после окраски мазков по Граму.
6.2. Учет результатов
После определения положительных и отрицательных результатов в
объемах посеянной в среду накопления воды определяют наиболее
вероятное число (НВЧ) энтерококков в 100 мл воды по одной из табл.
Приложения 8, соответствующей схеме посева и полученным результатам.
В протоколе анализа выдают НВЧ КОЕ энтерококков в 100 мл.
6.3. Упрощенный метод определения энтерококков
Допускается использовать лактозопептонную среду не только для
накопления колиформных бактерий при работе титрационным методом, но и
для накопления энтерококков. Упрощенный метод может быть применен при
исследовании воды водоемов, где уровень загрязнения по ОКБ не
3
превышает 10 /100 мл. Метод непригоден при исследовании сточных вод и
воды водоемов в местах их выпуска, так как дает заниженный результат.
После высева на сектора среды Эндо для определения колиформных
бактерий посевы в лактозопептонную среду продолжают инкубировать до 48
ч при температуре (37 +/- 1) град.С. Из посевов, где имеет место
помутнение, независимо от наличия или отсутствия газа, делают высев на
сектора азидной среды. При высеве из среды накопления необходимо часть
среды сверху осторожно, не взбалтывая, удалить пипеткой, оставшуюся
часть размешать и троекратно нанести материал бактериологической
петлей диаметром 2 - 3 мм на поверхность плотной азидной среды, п.
2.4.14. Посев производят штрихом, к концу которого должны быть
получены изолированные колонии. Молочно-ингибиторгную среду и
энтерококкагар при выполнении этого метода не применять.
При необходимости подтвердить наличие энтерококков на секторах
делают микроскопию окрашенных по Граму мазков, пересевают на
подтверждающую среду и определяют каталазную активность в соответствии
с п. 5.3. НВЧ энтерококков в 100 мл определяют по соответствующим
полученным результатам табл. Приложения 8.
Приложение 7
(обязательное)
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСЛА СТАФИЛОКОККОВ
Стафилококки определяют в воде водоемов, используемых для
купания, как показатель загрязнения воды микрофлорой верхних
дыхательных путей и кожных покровов человека.
При оценке качества воды индикаторами считают стафилококки,
обладающие лецитовителлазной активностью, в основном, Staphylococcus
aureus. Сигнальное значение для регламентации нагрузки на зону купания
имеет обнаружение свыше 10 стафилококков в 100 мл воды.
7.1. Метод мембранных фильтров
Пробу в объеме 50 мл фильтруют через 2 - 3 фильтра с таким
расчетом, чтобы получить изолированные колонии.
Фильтры помещают на желточно-солевой агар (п. 2.4.16) и
инкубируют при температуре 37 град.С в течение 24 ч.
Подсчитывают блестящие выпуклые колонии белого, палевого,
золотистого цвета, окруженные радужной с перламутровым блеском зоной.
96 - 98% таких колоний образованы Staphylococcus aureus.
При необходимости подтвердить принадлежность таких бактерий к
Staphylococcus aureus подозрительные колонии пересевают на
желточно-солевой агар бляшками, микроскопируют, определяют
плазмокоагулазную активность. При наличии мелких грамположительных
кокков, располагающихся в виде гроздей, и коагулировании плазмы дают
положительный ответ.
Число колоний стафилококков делят на объем воды, профильтрованной
через фильтры, на которых велся учет, и умножают на 100.
7.2. Титрационный метод
Делают посевы 10 мл, 1 мл и 0,1 мл исследуемой воды в 2 - 3
повторностях в стерильную пептонную воду с хлоридом натрия. 1 мл и 0,1
мл вносят в среду накопления, содержащую 10% хлорида натрия и 1%
пептона.
Для посева 10 мл заготавливают впрок сухие навески хлорида натрия
по 1 г, стерилизуя их сухим жаром, и 25%-ный стерильный раствор
пептона.
К 10 мл исследуемой воды прибавляют соответственно 1 г хлорида
натрия и 1 мл 25%-ного раствора пептона.
Посевы инкубируют при температуре 37 град.С в течение 48 ч. Высев
из посевов производят на желточно-солевой агар.
Вычисление числа стафилококков в 100 мл воды производят по
соответствующим таблицам Приложения 8.
Приложение 8
(обязательное)
ТАБЛИЦЫ РАСЧЕТА НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНОГО ЧИСЛА МИКРООРГАНИЗМОВ
Таблица 8.1
РАСЧЕТ НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНОГО ЧИСЛА БАКТЕРИЙ В 100 МЛ ВОДЫ
ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДОЕМОВ, ОБЕЗЗАРАЖЕННЫХ СТОЧНЫХ ВОД
--------------------------------------------------------------------
| Число положительных результатов из | НВЧ бактерий |
| | в 100 мл |
|-------------------------------------------------|----------------|
| 2 объемов | 2 объемов | 2 объемов | |
| по 1,0 мл | по 0,1 мл | по 0,01 мл | |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 0 | 0 | менее 50 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 0 | 1 | 50 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 0 | 2 | 90 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 1 | 0 | 50 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 1 | 1 | 90 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 1 | 2 | 140 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 2 | 0 | 90 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 2 | 1 | 140 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 0 | 2 | 2 | 190 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 0 | 0 | 60 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 0 | 1 | 120 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 0 | 2 | 190 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 1 | 0 | 130 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 1 | 1 | 200 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 1 | 2 | 280 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 2 | 0 | 210 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 2 | 1 | 290 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 1 | 2 | 2 | 370 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 0 | 0 | 230 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 0 | 1 | 500 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 0 | 2 | 950 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 1 | 0 | 620 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 1 | 1 | 1300 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 1 | 2 | 2100 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 2 | 0 | 2400 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 2 | 1 | 7000 |
|--------------|---------------|------------------|----------------|
| 2 | 2 | 2 | более 24000 |
--------------------------------------------------------------------
При исследовании других объемов воды, помимо 1, 0,1 и 0,01,
соответственно уменьшают или увеличивают НВЧ. Например, при
исследовании объемов 10 мл, 1 мл и 0,1 мл НВЧ уменьшают в 10 раз; при
исследовании объемов 0,1 мл, 0,01 мл и 0,001 мл НВЧ увеличивают в 10
раз; при исследовании объемов 0,01 мл; 0,001 мл и 0,0001 мл НВЧ
увеличивают в 100 раз и т.д.
Если при исследовании воды сделан посев более чем 3-х
десятикратных объемов воды или разбавлений, то учитывают 3 такие
последовательные объема, в последнем из которых получен один или
несколько отрицательных результатов. Например: 10 мл - обе пробирки
положительны, 1 мл - аналогично, 0,1 мл - положительный результат
только в одной пробирке, 0,01 мл - отрицательный результат в обеих
пробирках. Учитывают объемы 1 мл; 0,1 мл и 0,01 мл.
Таблица 8.2
РАСЧЕТ НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНОГО ЧИСЛА БАКТЕРИЙ
В 100 МЛ ВОДЫ ВОДОЕМОВ
-----------------------------------------------------------------------------------------------
| Число положительных | НВЧ | Число | НВЧ |
| результатов из | бактерий | положительных | бактерий |
| | в 100 | результатов из | в 100 |
| | мл | | мл |
|------------------------------|------------|---------------------------------|---------------|
| 3 | 3 | 3 | | 3 | 3 | 3 | |
| объемов | объемов | объемов | | объемов | объемов | объемов | |
| по 1 | по 0,1 | по | | по | по | по | |
| мл | мл | 0,01 | | 1 мл | 0,1 | 0,1 | |
| | | мл | | | мл | мл | |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 0 | 0 | менее | 2 | 0 | 0 | 91 |
| | | | 30 | | | | |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 0 | 1 | 30 | 2 | 0 | 1 | 140 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 0 | 2 | 60 <*> | 2 | 0 | 2 | 200 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 0 | 3 | 90 <*> | 2 | 0 | 3 | 260 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 1 | 0 | 30 <*> | 2 | 1 | 0 | 150 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 1 | 1 | 61 <*> | 2 | 1 | 1 | 200 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 1 | 2 | 92 <*> | 2 | 1 | 2 | 270 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 1 | 3 | 120 <*> | 2 | 1 | 3 | 340 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 2 | 0 | 62 <*> | 2 | 2 | 0 | 210 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 2 | 1 | 93 <*> | 2 | 2 | 1 | 280 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 2 | 2 | 120 <*> | 2 | 2 | 2 | 350 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 2 | 3 | 160 | 2 | 2 | 3 | 420 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 3 | 0 | 94 <*> | 2 | 3 | 0 | 290 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 3 | 1 | 130 <*> | 2 | 3 | 1 | 360 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 3 | 2 | 160 <*> | 2 | 3 | 2 | 440 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 0 | 3 | 3 | 190 <*> | 2 | 3 | 3 | 530 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 3 | 0 | 0 | 36 | 3 | 0 | 0 | 230 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 0 | 1 | 72 | 3 | 0 | 1 | 390 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 0 | 2 | 110 <*> | 3 | 0 | 2 | 640 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 0 | 3 | 150 <*> | 3 | 0 | 3 | 950 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 1 | 0 | 73 | 3 | 1 | 0 | 430 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 1 | 1 | 110 | 3 | 1 | 1 | 750 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 1 | 2 | 150 <*> | 3 | 1 | 2 | 1200 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 1 | 3 | 190 <*> | 3 | 1 | 3 | 1600 <*> |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 2 | 0 | 110 | 3 | 2 | 0 | 930 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 2 | 1 | 150 <*> | 3 | 2 | 1 | 1500 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 2 | 2 | 200 <*> | 3 | 2 | 2 | 2100 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 2 | 3 | 240 <*> | 3 | 2 | 3 | 2900 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 3 | 0 | 160 <*> | 3 | 3 | 0 | 2400 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 3 | 1 | 200 <*> | 3 | 3 | 1 | 4600 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 3 | 2 | 240 <*> | 3 | 3 | 2 | 11000 |
|---------|----------|---------|------------|-----------|-----------|---------|---------------|
| 1 | 3 | 3 | 290 <*> | 3 | 3 | 3 | более 11000 |
-----------------------------------------------------------------------------------------------
------------------------------------
<*> Вероятность ниже допустимого уровня.
Примечание. Схему посева табл. 8.2 используют при необходимости
получения более точных результатов.
Таблица 8.3
РАСЧЕТ НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНОГО ЧИСЛА БАКТЕРИЙ
В 100 МЛ ВОДЫ НЕЗАГРЯЗНЕННЫХ ВОДОЕМОВ
-------------------------------------------------------------------
| Число положительных результатов из | НВЧ |
| | бактерий |
| | в 100 мл |
|----------------------------------------------------|------------|
| 1 объема по 50 | 5 объемов по 10 | 5 объемов по 1 | |
| мл | мл | мл | |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 2 | 3 | 4 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 0 | 0 | менее 1 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 0 | 1 | 1 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 0 | 2 | 2 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 1 | 0 | 1 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 1 | 1 | 2 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 1 | 2 | 3 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 2 | 0 | 2 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 2 | 1 | 3 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 2 | 2 | 4 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 3 | 0 | 3 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 3 | 1 | 5 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 0 | 4 | 0 | 5 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 0 | 0 | 1 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 0 | 1 | 3 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 0 | 2 | 4 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 0 | 3 | 6 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 1 | 0 | 3 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 1 | 1 | 5 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 1 | 2 | 7 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 1 | 3 | 5 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 2 | 0 | 5 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 2 | 1 | 7 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 2 | 2 | 10 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 2 | 3 | 12 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 3 | 0 | 8 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 3 | 1 | 11 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 3 | 2 | 14 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 3 | 3 | 8 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 3 | 4 | 21 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 4 | 0 | 13 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 4 | 1 | 17 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 4 | 2 | 22 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 4 | 3 | 28 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 4 | 4 | 35 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 4 | 5 | 43 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 5 | 0 | 24 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 5 | 1 | 35 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 5 | 2 | 54 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 5 | 3 | 92 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 5 | 4 | 160 |
|----------------|-----------------|-----------------|------------|
| 1 | 5 | 5 | более |
| | | | 240 |
-------------------------------------------------------------------
Приложение 9
(справочное)
СХЕМА ПОСЕВА ВОДЫ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ ПРИ РАБОТЕ
МЕТОДОМ МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ
--------------------------------------------------------------------
| Объект исследования | Объем засеваемой воды в мл |
| | для определения |
|--------------------------|---------------------------------------|
| | колиформных бактерий | энтерококков |
|--------------------------|-----------------------|---------------|
| Водоемы, не загрязняемые | 100; 50; 10; 1 | 100; 50; 10 |
| сточными водами | | |
|--------------------------|-----------------------|---------------|
| Водоемы, загрязняемые | 10; 1; 0,1; 0,01 | 10; 1; 0,1 |
| сточными водами | | |
|--------------------------|-----------------------|---------------|
| Водоемы в зоне влияния | 0,1; 0,01; 0,001; | 1; 0,1; |
| выпуска сточных вод | 0,0001 | 0,01 |
--------------------------------------------------------------------
Приложение 10
(справочное)
СХЕМА ПОСЕВА ВОДЫ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ ПРИ РАБОТЕ
ТИТРАЦИОННЫМ МЕТОДОМ
------------------------------------------------------------------
| Объект | Объем засеваемой воды в мл для определения |
| исследования |-----------------------------------------------|
| | колиформных бактерий | энтерококков |
|----------------|-----------------------|-----------------------|
|Водоемы, не |2 или 3 повторности по:|50; 5 повторностей по: |
|загрязняемые |10; 1; 0,1 |10; 1 |
|сточными водами |2 или 3 повторности по:|2 или 3 повторности по:|
| |10; 1; 0,1; 0,01 |100; 10; 1; 0,1 |
|----------------|-----------------------|-----------------------|
|Водоемы, |2 или 3 повторности по:|2 или 3 повторности по:|
|загрязняемые |1; 0,1; 0,01; 0,001 |10; 1; 0,1; 0,01 |
|сточными водами | | |
|----------------|-----------------------|-----------------------|
|Водоемы в зоне |2 или 3 повторности по:|2 или 3 повторности по:|
|влияния выпусков|0,1; 0,01; 0,001; |1; 0,1; 0,01; 0,001 |
|сточных вод |0,0001, 0,00001 | |
------------------------------------------------------------------
Примечание. Схему посева в 2 или 3 повторностях выбирают в
зависимости от необходимой степени точности получаемых результатов.
Схему посева 50 мл, 5 по 10 мл и 5 по 1 мл используют при
исследовании воды чистых водохранилищ.Страницы: 1 2 |