подтверждения. 1 Если принять, что n - количество типичных колоний, а n - необходимое количество колоний для подтверждения, то: 1 - при n < 5, n = n; 1 - при 5 <= n < 25, то n = 5; 1 -- - при n >= 25, то n = \/ n (округленное до общего наивысшего количества). 13.1. Определение грам-принадлежности Классический способ определения грам-принадлежности бактериальных клеток окраской по Граму с последующей микроскопией можно заменить простым и быстрым способом, не требующим оптики, - тестом Грегерсена. Исследования проводят со свежими культурами. Бактериальную массу, взятую с плотной среды, в течение нескольких секунд эмульгируют на предметном стекле в капле 3%-ного водного раствора КОН. Образование слизи, тянущейся за петлей, указывает на принадлежность испытуемой культуры к грамотрицательным микроорганизмам. Грамположительные микроорганизмы в этой реакции слизь не образуют. 13.2. Постановка оксидазного теста Используют реактивы, рекомендованные в МУК 4.2.1018-01. Предпочтительно пользоваться готовыми индикаторными системами, изготовленными промышленным способом (например, СИБ-оксидазы, диски оксидазы производства LACHEMA, MERCK, DIFCO). Надежный результат оксидазного теста может быть получен только при использовании суточной культуры, выращенной на неселективном питательном агаре. Следует иметь в виду, что при постановке оксидазного теста путем наложения мембранного фильтра с выросшими колониями на оксидазный реактив, постановки реакции с колонией, выращенной на среде Эндо, типичные темно-красные колонии могут давать нечеткую реакцию. Каждый раз при постановке теста (серии тестов) проводят контрольные испытания с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную (Pseudomonas aeruginosa) и отрицательную (Е.coli) реакции. Для постановки реакции используют пастеровскую пипетку или проверенную бактериологическую петлю, не давшую ложных реакций в указанном тесте при испытании с контрольными культурами. Методика постановки Исследуемую колонию пересевают на скошенный питательный агар. Инкубируют при (37 +/- 1) ЬC в течение 18 - 24 часов. Оксидазный диск слегка смачивают дистиллированной водой / пропитывают реактивом фильтровальную бумагу. Делают мазок культуры на диске с реактивом. Появление окраски не позднее чем через 10 секунд рассматривается как положительная реакция. При использовании коммерческих тест-систем процедура определения выполняется согласно инструкции. 13.3. Определение ферментации углеводов Предпочтительно исследовать 18 - 24-часовую субкультуру, полученную на питательном агаре. Для контроля используются жидкие или полужидкие среды, проверенные ранее, как указано в разделе 11. Посев исследуемого штамма осуществляют в среды с углеводами по общепринятым методикам. Постановка положительного и отрицательного контроля осуществляется, как указано в пункте 11.5.3. Инкубацию посевов проводят согласно методической документации. Оценку результатов проводят по окончании срока инкубации путем сравнения изменений в исследуемом посеве с изменениями в положительном контроле. Обязательным условием является отсутствие изменений отрицательного контроля. Раздел составлен на основе: ГОСТа 26670-91 "Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов"; стандарта АФНОР NF Т 90-416, 1985; Методических рекомендаций "Обнаружение и идентификация Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных жидкостях)": МЗ СССР. М., 1984; ГОСТа 18963-73 "Вода питьевая. Методы санитарно - бактериологического анализа". М., 1973; XI Государственной фармакопеи СССР. М., 1998; ИСО 7218-96; Инструкции к ОКСИ-тест(у), ЛАХЕМА, Чешская Республика; Определителя бактерий Берджи / Под ред. Дж Хоулта, Н. Кинга, П. Спита, Дж. Стейли и С. Уилльямса. М.: "Мир", 1997. БИБЛИОГРАФИЯ 1. Бактериологический контроль питательных сред. Методические рекомендации в помощь бактериологам санитарно-эпидемических станций и больниц. Хабаровск: МЗ РСФСР, 1979. 2. Методические указания по бактериологическому контролю качества проведения противоэпидемических мероприятий в акушерских стационарах. Прилож. 4 к Приказу Комитета здравоохранения г. Москвы и ЦГСЭН в г. Москве N 617/6 от 19.11.98. 3. Руководство по аккредитации для лабораторий, проводящих микробиологическое тестирование. Европейская кооперация по аккредитации лабораторий (EAL), 1996. 4. Руководство по контролю качества питьевой воды. Т. 1. ВОЗ. Женева, 1994. 5. Методы для унификации санитарно-микробиологических исследований воды / Сборник СЭВ: Бад Эльстер, 1979. 6. Унифицированные санитарно-микробиологические методы исследований воды в странах - членах СЭВ / Сборник СЭВ. М., 1988. 7. Council directive 98/93/EC of 3 November 1998 on the quality of water intended for human consumption. Official Journal of the European Communities. 5.12.98 (Директива Совета Европейского Союза 98/83/ЕС по качеству воды, предназначенной для потребления человеком). 8. Guidelines for drinking-water quality. V. 2. WHO. Geneva, 1996. 9. ISO 3696-87 "Вода для аналитических лабораторных исследований. Спецификация и методы испытания". 10. ISO 8402:1994 (E/F/R). Управление качеством и обеспечение качества. 2-ое изд./ Словарь. 11. ISO 6887-1983 "Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований". 12. ISO 7218:1996 " Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Общие правила микробиологических исследований". 13. ISO 7704-85 "Оценка мембранных фильтров, используемых для микробиологических анализов" ("Water quality. Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses"). 14. ISO 8199:1988 "Общее руководство по определению количества микроорганизмов с помощью питательной среды". 15. ISO 9998:1991(Е) "Качество воды. Методы оценки и контроля микробиологического подсчета колоний в средах с применением тестов качества воды". 16. ISO 10705-1:1995 "Water quality - Detection and enumeration of bacteriophages - Part 1: Enumeration of F-specific RNA bacteriophages". 17. ISO 10705-1:1995 "Water quality - Detection and enumeration of bacteriophages - Part 2: Enumeration of somatic bacteriophages". 18. NFT 90-414. AFNOR, 1985. 19. Programme N 100/03. Analyses des eaux. COFRAC SECTION ESSAIS, 1997. 20. Report on Public Health and Medical Subjects N 71. Methods for the Examination of Waters and Associated Materials. Part 1. Drinking Water. The Microbiology of Water, 1994. Приложение 1 (информационное) СТРУКТУРА ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ПО ОБЪЕКТАМ КОНТРОЛЯ --------------------------------------------------------------------------------------- |--------------- |----------------------| ----------------| || Оборудование| || Эталонные || | Расходные || || и помещения | || культуры || | материалы || |--------------- || Ведение, || ----------------| |---------------------------- || контроль || -------------------------------| || Термостаты, холодильники | |----------------------| | Питательные среды: || || Контроль температур | | | | - контроль документации || || | | | | - контроль условий || |---------------------------- | | | хранения || |---------------------------- | | | - контроль приготовления || || Стерилизаторы | | | | - качественный контроль || || паровые и суховоздушные | | | | - количественный контроль || || | | | | || || Контроль стерилизации: | | | | || || | | | -------------------------------| || - химический | | | -------------------------------| || - термический | | | | Мембранные фильтры || || - биологический | | | | Контроль эффективности || |---------------------------- | | -------------------------------| |---------------------------- | | -------------------------------| || Фильтровальные | | | | Реактивы, типовые || || установки | | | | сыворотки, ингибиторы || || Контроль стерильности | | | | Контроль качества || |---------------------------- | | -------------------------------| |---------------------------- | | | || Посуда для отбора проб |-------------------------- | || Контроль обсемененности || К/К |-------------------------------| |------------------------------------------------------ | |---------------------------- | | -------------------------------| || Помещения | | | | Процедура анализа проб || || - Контроль обсемененности| | | | Постановка контрольных || || воздуха, поверхностей | | | | тестов || || - Контроль эффективности | | | -------------------------------| || и времени экспозиции УФО | | | | |---------------------------- | | | |---------------------------- | | | || Дистиллированная вода | | | | || Контроль качества | |----------------------| | |---------------------------- || Процедуры || | |---------------------------- || контроля || | || Средства измерения и | || качества || | || испытания | || Внедрение, || | || - Проверка | || совершенствование || | || - Аттестация | || || | |---------------------------- |----------------------| | --------------------------------------------------------------------------------------- Приложение 2 (информационное) СТРУКТУРА ОРГАНИЗАЦИИ ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА В ЛАБОРАТОРИИ ------------------------------------------------------------------------------ | N | Область контроля | Периодичность | | п/п | | | |------|---------------------------------------------------------------------| | 1 | Условия проведения испытаний | |------|---------------------------------------------------------------------| | 1.1 | Общие помещения лаборатории "чистой | Ежедневно | | | зоны" | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 1.2 | Уборка и дезобработка помещений | Текущая уборка 2 раза | | | "заразной зоны" | в день, генеральная | | | | уборка 1 раз в неделю | | | | по графику | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 1.3 | Уборка и дезобработка оборудования | По графику | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 1.4 | Воздух боксов, ламинарных укрытий и | В дни проведения работ, | | | помещения для фильтрации проб воды на | не реже 2 раз в неделю | | | обсемененность | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 1.5 | Воздушный поток ламинарных укрытий на | 1 раз в год | | | количество микрочастиц | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 1.6 | Смывы с поверхностей и оборудования | Не реже 1 раз в месяц | |------|---------------------------------------------------------------------| | 2 | Процедура анализа | |------|---------------------------------------------------------------------| | 2.1 | Положительный и отрицательный контроль | Каждый раз при | | | подтверждающих биохимических тестов при | постановке | | | определении: общих и термотолерантных | подтверждающих | | | колиформных бактерий, БГКП, фекальных | биохимических тестов | | | стрептококков, патогенных стафилококков | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 2.2 | Положительный и отрицательный контроль | Каждый раз при | | | при постановке оксидазного теста | постановке теста | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 2.3 | Контроль стерильности фильтровальных | В день использования | | | установок | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 2.4 | Контроль качества дистиллированной воды | 1 раз в месяц | | | | Внепланово: при | | | | нестандартных | | | | результатах контроля | | | | воды, после проведения | | | | ремонта установки, | | | | замены фильтров | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 2.5 | Контроль мембранных фильтров | При поступлении новой | | | | партии | |------|---------------------------------------------------------------------| | 3 | Оборудование | |------|---------------------------------------------------------------------| | 3.1 | Средства измерения и испытаний | Поверка и аттестация по | | | | утвержденному графику | |------|---------------------------------------------------------------------| | 3.2 | Паровые стерилизаторы | |------|---------------------------------------------------------------------| | 3.2.1| Химический контроль | При каждой загрузке | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 3.2.2| Термический контроль | 2 раза в месяц | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 3.2.3| Биологический контроль | 2 раза в год | |------|---------------------------------------------------------------------| | 3.3 | Воздушные стерилизаторы | |------|---------------------------------------------------------------------| | 3.3.1| Химический контроль | При каждой загрузке | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 3.3.2| Термический контроль | 2 раза в месяц | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 3.3.3| Биологический контроль | 2 раза в год | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 3.4 | Контроль температуры в термостатах | Ежедневно | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 3.5 | Контроль температуры в холодильниках | Еженедельно | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 4 | Контроль стеклянных флаконов для отбора | Не реже 1 раза в квартал | | | проб на обсемененность | при контроле режимов | | | | стерилизации | |------|---------------------------------------------------------------------| | 5 | Питательные среды | |------|---------------------------------------------------------------------| | 5.1 | Проверка документации и визуальный | При поступлении | | | контроль | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 5.2 | Контроль сред на этапе приготовления | Каждую варку | | | (pH, внешний вид, стерильность) | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 5.3 | Качественный контроль ростовых и | Каждую варку | | | дифференцирующих свойств | | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 5.4 | Количественный контроль ростовых, | При поступлении новых | | | дифференцирующих и ингибирующих свойств | партий (серий) сред При | | | питательных сред | окончании срока | | | | реализации среды. При | | | | выявлении нарушений | | | | условий хранения | |------|---------------------------------------------------------------------| | 6 | Ведение рабочей коллекции эталонных бактериальных культур | |------|---------------------------------------------------------------------| | 6.1 | Создание запаса эталонных культур | 1 раз в 4 - 5 лет | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 6.2 | Восполнение запаса рабочих культур | 1 раз в квартал | |------|------------------------------------------|--------------------------| | 6.3 | Подготовка культур для целевого | Ежедневно | | | использования | | ------------------------------------------------------------------------------ Приложение 3 (рекомендательное) ЛИСТ КОНТРОЛЯ ТЕМПЕРАТУРНОГО РЕЖИМА Норматив для данного объекта: ---------------------------------------------------------------------- | Дата | Значение температуры (ЬC) | Заключение | Подпись | |-------|-------------------------------|-------------|--------------| |-------|-------------------------------|-------------|--------------| |-------|-------------------------------|-------------|--------------| |-------|-------------------------------|-------------|--------------| ---------------------------------------------------------------------- Приложение 4 (обязательное) ЖУРНАЛ контроля работы стерилизаторов воздушного, парового (автоклава) Код формы по ОКУД Код учреждения по ОКПО ------------------------------------------------------------------------- | МИНЗДРАВ СССР | | МЕДИЦИНСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ | | Наименование учреждения | | Форма N 257/у | | Лаборатория | | Утв. Минздравом СССР 04.10.80, N 1030 | |-----------------------------------------------------------------------| | марка стерилизатора -------------- | | зав. N стерилизатора ------------- | |-----------------------------------------------------------------------| | Указать нормативно-техническую документацию (НТД) | | контроля работы стерилизаторов: | | 1. ---------------------------------------------- | | 2. ---------------------------------------------- | | 3. ---------------------------------------------- | | 4. ---------------------------------------------- | | 5. ---------------------------------------------- | ------------------------------------------------------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- | Дата | Подразделение | Стерилизуемые изделия | Упаковка | Время | Режим | Тест-контроль | Заключение | Подпись | | | | | | стерилизации | | | <*> | оператора | | | | | | (мин.) | | | | | |------|---------------|---------------------------|----------|-----------------|-------------------------|----------------------------|------------|-------------| | | | наименование| количество | | начало | конец | давление | температура | биологич. | термич. | хим. | | | |------|---------------|-------------|-------------|----------|---------|-------|-----------|-------------|-----------|---------|------|------------|-------------| |------|---------------|-------------|-------------|----------|---------|-------|-----------|-------------|-----------|---------|------|------------|-------------| |------|---------------|-------------|-------------|----------|---------|-------|-----------|-------------|-----------|---------|------|------------|-------------| |------|---------------|-------------|-------------|----------|---------|-------|-----------|-------------|-----------|---------|------|------------|-------------| ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Заполняется ответственным инженером: 1 раз в неделю по результатам химического контроля, 2 раза в месяц по результатам термического контроля. Приложение 5 (рекомендательное) ПРИМЕРНАЯ ФОРМА РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЯ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ВОЗДУХА Норма: не более 3 колоний на чашке (аспирационный метод) не более 500 КОЕ/куб. м (сендимитационный метод) ---------------------------------------------------------------------- |Дата| Комната | |----|---------------------------------------------------------------| | | точка N 1 | точка N 2 | подпись | примечания | | | на чашке | на чашке | исполнителя | | | | (в 1 куб. м) | (в 1 куб. м) | | | |----|--------------|--------------|--------------|------------------| |----|--------------|--------------|--------------|------------------| ---------------------------------------------------------------------- Приложение 6 (рекомендательное) ПРИМЕРНАЯ ФОРМА РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЯ СТЕРИЛЬНОСТИ ФУ ---------------------------------------------------------------------- | Дата | N установки | Подпись | Примечание | | |-------------------------------| исполнителя| | | | 1 | 2 | 3 | | | |------|----------|----------|---------|------------|----------------| |------|----------|----------|---------|------------|----------------| |------|----------|----------|---------|------------|----------------| ---------------------------------------------------------------------- Приложение 7.2 (информационное) СХЕМА ВЕДЕНИЯ КУЛЬТУР ТЕСТОВЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ (ОПТИМАЛЬНЫЙ ВАРИАНТ) ----------------------------------------------------------------------------- | ------------------------------------------------------ | | | Лиофилизированная культура тест-штамма, полученная | | | | из официальной коллекции микроорганизмов | | | | -- - - - - - - - - - - - -- | | | | Хранение при Т = 4 - 6 ЬC | | | | -- - - - - - - - - - - - -- | | | ------------------------------------------------------ | | | | | \/ | | ------------------------------------------------------ | | | Восстановление культуры с использованием плотной и | | | | жидкой питательных сред (согласно пункту 10.2.1) | | | ------------------------------------------------------ | | | | | | | | | V V V | | | ------------------------------------------------------- | | |<--| Проверка на чистоту роста и отсутствие диссоциации | | | |<--| Проверка основных видовых свойств культуры | | | | | В случае обнаружения более 25% полиморфных | | | | | колоний и (или) несоответствия паспортным свойствам | | | | | культура не может быть использована | | | | ------------------------------------------------------- | | | | | V | | ----------------------------------------------------------- | | | Создание запасов эталонной культуры | | | ---| Пересев восстановленной культуры на среду хранения |--- | | -| >| Закладка на длительное хранение в достаточном количестве| | | | || ----------------------------------------------------------- | | | | -------------------------------------------- | | | || | Хранение: при 70 г рад.C; в жидком азоте | | | | | | или в запаянных ампулах на голодной среде| | | | || | Использование по мере необходимости | | | | | | (1 емкость в квартал) | | | | || -------------------------------------------- | | | | -------------------------------------------------- | | | |-------| Запасы эталонной культуры длительного хранения |-------- | | -------------------------------------------------- | | | | | | V | | | ------------------------------------------------------- | | | Восстановление культуры | | | | ------------------------------------------------------- | | | | | | | | |--------------| V V V | | | Не || -------------------------------------------------------| | | допускается || | Проверка на чистоту роста и отсутствие диссоциации || | |--------------|<--| Проверка основных видовых свойств культуры || | |<--| В случае обнаружения более 25% полиморфных || | | | | колоний и (или) несоответствия паспортным свойствам || | | | культура не может быть использована || | | | -------------------------------------------------------| | | | | | V | | | ------------------------------------------------------- | | -----| Создание запасов рабочей культуры | | | | 1 раз в квартал пересев восстановленной | | | ---| культуры на достаточное количество пробирок, |--- | | - |->| с ПЖА для последующего хранения | | | | | | ------------------------------------------------------- | | | | ------------------------------------------------ | | | | | | Рабочую культуру хранят при Т = 4 - 6 град.С | | | | | | не более 3 месяцев в условиях, | | | | | | | предохраняющих от высыхания | | | | | ------------------------------------------------ | | | | | ------------------------------------------------- | | | ------| Рабочая культура тест-штамма на среде хранения|------ | | | ------------------------------------------------- | | | | | | |-------------- V | | |Не | -------------------------------------------------- | | |рекомендуется| | Подготовка культуры для целевого использования | | | | | | (для посева на испытуемые среды используют | | | --------------- | культуры тест-штаммов, прошедшие не более | | | - - - - - - - -| двух пассажей на питательных средах) | | | -------------------------------------------------- | ----------------------------------------------------------------------------- Приложение 8.1 (обязательное) ЖУРНАЛ приготовления и контроля питательных сред Код формы по ОКУД Код учреждения по ОКПО -------------------------------------------------------------------------- | МИНЗДРАВ СССР | | МЕДИЦИНСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ | | Наименование учреждения| | Форма N 256/у | | Лаборатория | | Утв. Минздравом СССР 04.10.80 N 1030 | |------------------------------------------------------------------------| | Начат "--" -------- Окончен "--" --------- | |------------------------------------------------------------------------| | 1. При заполнении графы 6 указываются данные о сухих питательных | | средах, пептоне и т.п. | |------------------------------------------------------------------------| | 2. В графах 7 - 11 могут приводиться данные о количестве засеваемых | | микробных клеток. | |------------------------------------------------------------------------| | 3. Для полного учета в журналах ежедневно ведутся записи о количестве | | приготовленных питательных сред, независимо от проведения контроля. | -------------------------------------------------------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- | N | Дата | Наименование | Количество | Серия и дата | Тесты, применяемые для контроля | Дата | Заключение о | Подпись | |п/п| приготовления | | приготовленной | выпуска | | контроля | пригодности | исполнителя | | | | | среды, л | препарата, из |------------------------------------------------------------------------| | | | | | | | | которого | pH | pH | стерильность | качественный | количественный | | | | | | | | | приготовлена | требуемый | фактический | | контроль | контроль | | | | | | | | | среда | | | | | | | | | |---|---------------|--------------|----------------|---------------|-----------|-------------|--------------|--------------|----------------|----------|--------------|-------------| |---|---------------|--------------|----------------|---------------|-----------|-------------|--------------|--------------|----------------|----------|--------------|-------------| |---|---------------|--------------|----------------|---------------|-----------|-------------|--------------|--------------|----------------|----------|--------------|-------------| |---|---------------|--------------|----------------|---------------|-----------|-------------|--------------|--------------|----------------|----------|--------------|-------------| -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Приложение 8.2 (рекомендательное) ПРОТОКОЛ КОЛИЧЕСТВЕННОГО КОНТРОЛЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ---------------------------------------------------------------------- | Дата выполнения контроля | | |----------------------------------------------|---------------------| | Цель исследования | | |----------------------------------------------|---------------------| | Исполнитель | | |----------------------------------------------|---------------------| | Название исследуемой среды | | |----------------------------------------------|---------------------| | Серия исследуемой среды | | |----------------------------------------------|---------------------| | Название контрольной среды | | |----------------------------------------------|---------------------| | Серия контрольной среды | | ---------------------------------------------------------------------- 1. Контроль правильности разведения суспензии тестового штамма ---------------------------------------------------------------------- | Показатель | Результат | |-----------------------------------------------|--------------------| | Количество колоний при посеве 0,1 мл из 6 | | | | | разведения (КОЕ/на чашку) | | | | |-----------------------------------------------|--------------------| | Среднее количество колоний на чашке при | | | посеве 0,1 мл из 6 разведения (КОЕ/на чашку) | | | Норма = 100 +/- 20 | | |-----------------------------------------------|--------------------| | Количество колоний при посеве 0,1 мл из 7 | | | | | разведения (КОЕ/на чашку) | | | | |-----------------------------------------------|--------------------| | Среднее количество колоний на чашке при | | | посеве 0,1 мл из 7 разведения (КОЕ/на чашку) | | | Норма ~= 1/10 от среднего значения для 6-го | | | разведения | | |-----------------------------------------------|--------------------| | Заключение | | ---------------------------------------------------------------------- 2. Определение показателей чувствительности и скорости роста ------------------------------------------------------------------ | | N чашки или | Условия посева <*> | | | пробирки |-------------------------------| |------------------|-------------|-------|-------|-------|-------| |Наличие роста <**>| 1 | | | | | | |-------------|-------|-------|-------|-------| | | 2 | | | | | | |-------------|-------|-------|-------|-------| | | 3 | | | | | |----------------------------------------------------------------| |Время появления роста (часы) | |----------------------------------------------------------------| |Заключение | ------------------------------------------------------------------ -------------------------------- <*> В жидкие среды засевают по 1,0 мл суспензии из 4-го, 5-го, 6-го и 7-го разведений. На плотные среды засевают по 0,1 мл суспензии из 5-го, 6-го, 7-го и 8-го разведений. <**> Наличие роста на чашке или в пробирке отмечается знаком "+", отсутствие знаком "-". 3. Определение дифференцирующих свойств среды <*> -------------------------------- <*> Определяется только для дифференциальных сред. Наличие признака отмечается знаком "+", отсутствие знаком "-". ------------------------------------------------------------------ | Признак, определенный | Наличие признака | | в паспорте на среду | у колоний тестового штамма | |-----------------------------------|----------------------------| |-----------------------------------|----------------------------| |----------------------------------------------------------------| | Заключение | ------------------------------------------------------------------ 4. Определение % всхожести 4.1. Расчет посевной дозы Посевная доза рассчитывается по данным, полученным при определении правильности разведения (п. 1). ------------------------------------------------------------------ | Среднее число КОЕ в 0,1 мл 6-го | Посевная доза (мл) | | разведения суспензии тестового штамма | | |----------------------------------------|-----------------------| ------------------------------------------------------------------ 4.2. Расчет % всхожести ---------------------------------------------------------------------- | Среда | Количество колоний | Среднее к-во | | |------------------------| колоний | | | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | | |-------------------------|----|----|----|----|----|-----------------| | Контрольная среда | | | | | | | |-------------------------|----|----|----|----|----|-----------------| | Исследуемая среда | | | | | | | |-------------------------|------------------------|-----------------| | % всхожести на ИС | | | |-------------------------|------------------------|-----------------| | Достоверность различия | | | | ИС:КС по критерию t | | | | 95 | | | |--------------------------------------------------------------------| | Заключение | ---------------------------------------------------------------------- 5. Оценка показателя ингибиции --------------------------------------------------------------------- | Среда | Среднее к-во колоний | | | |---------------------------------| | | | 1 | 2 | 3 | | | ------------------|----------|----------|-----------| | | Контрольная среда | | | | | | ------------------|----------|----------|-----------| | | Исследуемая среда | | | | | |-------------------------------------------------------------------| | Заключение | |-------------------------------------------------------------------| | Заключение о пригодности питательной среды | --------------------------------------------------------------------- Приложение 9 (рекомендательное) ПРОТОКОЛ КОНТРОЛЯ МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ ---------------------------------------------------------------------- | Дата выполнения контроля | | |----------------------------------|---------------------------------| | Исполнитель | | |----------------------------------|---------------------------------| | Название контрольной среды | | |----------------------------------|---------------------------------| | Серия контрольной среды | | |----------------------------------|---------------------------------| | Марка исследуемых фильтров | | |----------------------------------|---------------------------------| | Серия исследуемых фильтров | | |----------------------------------|---------------------------------| | Марка контрольных фильтров <*> | | |----------------------------------|---------------------------------| | Серия контрольных фильтров <*> | | ---------------------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Заполняется при сравнении мембранных фильтров разных серий одного производителя или фильтров разных производителей. 6. Расчет посевной дозы Посевная доза должна составлять 25 - 100 КОЕ на фильтр диаметром 47 мм и 25 - 60 КОЕ на фильтр диаметром 35 мм. ---------------------------------------------------------------------- | Показатель | Результат | |-----------------------------------------------|--------------------| | Количество колоний при посеве 0,1 мл из 6 | | | | | разведения (КОЕ/на чашку) | | | | |-----------------------------------------------|--------------------| | Среднее количество колоний на чашке при | | | посеве 0,1 мл из 6 разведения (КОЕ/на чашку) | | |-----------------------------------------------|--------------------| | Посевная доза (мл) | | ---------------------------------------------------------------------- 7. Определение % удержания МФ ---------------------------------------------------------------------- | Вид посева | Кол-во колоний на | Среднее | | | чашке или МФ | к-во | | |------------------------| колоний | | | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | | |------------------------------|----|----|----|----|----|------------| | Прямой поверхностный посев | | | | | | | |------------------------------|----|----|----|----|----|------------| | Посев методом фильтрации | | | | | | | | на исследуемые МФ (ИМФ) | | | | | | | |------------------------------|----|----|----|----|----|------------| | Посев методом фильтрации на | | | | | | | | контрольные МФ <*> (КМФ) | | | | | | | |------------------------------|----|----|----|----|----|------------| | % удержания ИМФ | | | | | | | |------------------------------|----|----|----|----|----|------------| | % удержания КМФ | | | | | | | |------------------------------|----|----|----|----|----|------------| | Достоверность различия по | | | | | | | | критерию t | | | | | | | | 95 | | | | | | | |--------------------------------------------------------------------| | Заключение о пригодности исследуемых МФ | ---------------------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Заполняется при сравнении мембранных фильтров разных серий одного производителя или фильтров разных производителей. Приложение 10 (обязательное) ОЦЕНКА ДОСТОВЕРНОСТИ РАЗЛИЧИЯ СРЕДНИХ ЗНАЧЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КРИТЕРИЯ СТЬЮДЕНТА-ФИШЕРА Достоверность различия средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой среде / мембранных фильтрах, оценивают с использованием критерия Стьюдента для вероятности 95%. Для определения достоверности различия средних величин двух вариационных рядов с использованием критерия Стьюдента сначала рассчитывают дисперсию для каждого сравниваемого ряда значений, далее вычисляется критерий Стьюдента (t). 1. Определение дисперсии 2 Дисперсия (сигма ) вычисляется по формуле: ---------------------------------------------------------------------- | 2 | | SUM(x - M) | | 2 n | | сигма = ------------, | | N - 1 | ---------------------------------------------------------------------- где: 2 сигма - дисперсия; SUM - знак суммирования; x - варианты количества колоний на чашках (фильтрах) на данной n среде; M - среднее арифметическое значение количества выросших колоний; N - количество посевов в исследовании выполненных на данной среде. 2. Расчет значения критерия Стьюдента Критерий Стьюдента (t) вычисляется по формуле: ---------------------------------------------------------------------- | ------------------ | | / -1 | | / 1 - 2 (N1 + N2) | | |t| = (M1 - M2) \ / -------------------, | | \ / 2 2 | | \ / сигма1 сигма2 | | \ / ------- + ------- | | \/ N2 N1 | ---------------------------------------------------------------------- где: t - критерий Стьюдента; M1 и M2 - сравниваемые средние арифметические значения количества колоний; 2 2 сигма1 и сигма2 - дисперсии сравниваемых рядов посевов; N1 и N2 - количество посевов в исследуемых вариационных рядах. Для оценки достоверности различия средних величин полученное значение критерия сравнивается с табличным значением, для числа степеней свободы ню = N1 + N2 - 2 и вероятности 95%. Таблица значений tp по Стьюденту-Фишеру прилагается. Знак критерия не принимается во внимание. Если полученное значение критерия больше табличного, то различие между сравниваемыми средними величинами достоверно. ТАБЛИЦА ЗНАЧЕНИЙ tp (ПО СТЬЮДЕНТУ-ФИШЕРУ) ------------------------------------------------------------------- | Число степеней | Требуемый уровень вероятности | | 1 | доверительного интервала средней p | | свободы n |-----------------------------------------------| | | 0,95 | 0,99 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 1 | 12,71 | 63,66 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 2 | 4,3 | 9,92 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 3 | 3,18 | 5,84 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 4 | 2,78 | 4,6 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 5 | 2,57 | 4,03 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 6 | 2,45 | 3,71 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 7 | 2,36 | 3,5 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 8 | 2,31 | 3,36 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 9 | 2,26 | 3,25 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 10 | 2,23 | 3,17 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 11 | 2,2 | 3,11 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 12 | 2,18 | 3,06 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 13 | 2,16 | 3,01 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 14 | 2,14 | 2,98 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 15 | 2,13 | 2,95 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 16 | 2,12 | 2,92 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 17 | 2,11 | 2,9 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 18 | 2,1 | 2,88 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 19 | 2,09 | 2,86 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 20 | 2,09 | 2,84 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 21 | 2,08 | 2,83 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 22 | 2,07 | 2,82 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 23 | 2,07 | 2,81 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 24 | 2,06 | 2,8 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 25 | 2,06 | 2,79 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 26 | 2,06 | 2,78 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 27 | 2,05 | 2,77 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 28 | 2,05 | 2,76 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 29 | 2,04 | 2,76 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 30 | 2,04 | 2,75 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 40 | 2,02 | 2,7 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 60 | 2 | 2,66 | |-----------------|------------------------|----------------------| | 120 | 1,98 | 2,62 | |-----------------|------------------------|----------------------| | бесконечность | 1,96 | 2,58 | ------------------------------------------------------------------- Приложение 11 (информационное) ПЕРЕЧЕНЬ ПЕРСПЕКТИВНОГО ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ВОДЫ, ПОВЫШАЮЩЕГО КАЧЕСТВО РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА ------------------------------------------------------------------------------------------- | N | Наименование | Применение | Преимущества | | п/п| оборудования | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 1 | Магнитные мешалки с | Приготовление | - Равномерность нагрева | | | регулируемым | питательных сред | способствует сохранению | | | подогревом до 200 | | легкоразлагаемых составных | | | град. С | | компонентов среды | | | | | - Среды не пригорают, не "убегают" | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 2 | Машина для | Приготовление | - Полная автоматизация процесса | | | приготовления и | питательных сред | - Гарантия стабильного качества | | | розлива питательных | | питательных сред | | | сред (во флаконы и | | - Сокращение трудозатрат (при | | | чашки Петри) | | больших объемах) | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 3 | Мембранные фильтры | Концентрирование воды | - Повышение качества получаемого | | | современного | | результата | | | уровня, | | - Рост изолированных колоний | | | характеризующиеся: | | - Повышение точности и предела | | | - оптимальным для | | обнаружения метода исследования | | | бактериологических | | - Повышение точности метода | | | исследований | | - Обеспечение удобства при учете | | | диаметром пор 0,45 | | колоний, повышение точности | | | мк | | учета результатов | | | - размером 47 - | | - Сокращение времени на проведение | | | 50 мм в диаметре | | подготовительных работ и | | | - наличием сетки на | | фильтрацию проб воды | | | поверхности фильтра | | - Отсутствие "отходов" в | | | - стерильные | | результате деформации фильтров | | | | | при стерилизации | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 4 | Автоматический | Просчет количества | - Полная автоматизация процесса | | | счетчик колоний | колоний на чашках | - Просчет чашки за несколько | | | | | секунд | | | | | - Автоматическая запись результатов | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 5 | Установка для | Приготовление | - Повышение качества питательных | | | получения | питательных сред | сред | | | ультрачистой воды | | - Гарантия отсутствия химических | | | | | веществ, влияющих на рост | | | | | микроорганизмов | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 6 | Ламинарный бокс | Выполнение работ по | - Обеспечение условий стерильности | | | | пересеву колоний и | для выполнения работ и | | | | культур для | предотвращения контаминации | | | | идентификации | исследуемого материала и окружающей | | | | Розлив питательных | среды | | | | сред | - Наличие ламинарного бокса | | | | | приобретает особую актуальность | | | | | при отсутствии соответствующих | | | | | боксов для работ по идентификации | | | | | и розлива питательных сред | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 7 | Одноразовая посуда | По этапам анализа | Качество результата, снижение | | | (чашки Петри, | | трудозатрат | | | пипетки, пробирки и | | | | | т.д.), одноразовая | | | | | посуда для отбора | | | | | проб | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 8 | Чашки Петри | Посев одного фильтра | Предотвращение возможности зароста | | | диаметром 55 - 60 | на чашку | фильтров, расположенных | | | мм | | на одной чашке, ведущего к | | | | | необходимости повторного | | | | | исследования | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 9 | Микроскоп, | Микроскопия препаратов | Повышение надежности определения | | | оснащенный оптикой | при определении цист | цист и качества анализа | | | дифференциально - | лямблий | | | | интерференционного | | | | | контраста | | | | | (DICоптика) | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 10 | Встряхиватель для | На всех этапах, | - Равномерность распределения | | | пробирок | требующих равномерного | микроорганизмов в суспензии, пробе | | | | распределения | - Повышение точности | | | | | количественного результата анализа | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 11 | Термостаты с | Инкубация посевов | - Обеспечение требуемых | | | вентиляцией и | | характеристик поддержания заданной | | | программированием | | температуры | | | режимов инкубации | | - Возможность перевода в заданный | | | | | период на задаваемый режим, | | | | | в т.ч. температуру холодильника | | | | | (сокращение трудозатрат по | | | | | оценке результатов в выходные | | | | | дни) | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 12 | Газовые | При отсутствии | (в отличие от спиртовок) | | | лабораторные | централизованной | - Обеспечивают регулируемое | | | горелки со сменными | подачи газа в | пламя и температуру горения | | | газовыми | лаборатории | - Упрощают технику проведения | | | баллончиками, | | анализа | | | газовые факелы для | | - Обеспечивают зону стерильности | | | фламбирования | | при фильтрации проб | | | воронок для | | | | | фильтрации | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 13 | Питательные среды | Определение | Позволяют получать результат | | | импортного | термотолерантных | инкубации через 18 - 24 часа в | | | производства для | колиформ методом | термостате при температуре 44 | | | определения | мембранных фильтров | град. C | | | термотолерантных | | | | | колиформ | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 14 | Питательная среда | Определение спор | - Готовая среда промышленного | | | SPS (зарубежного | сульфитредуцирующих | производства | | | производства) | клостридий | - Унификация метода | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 15 | Питательные среды | Все анализы | - Не требуют приготовления сред | | | на подложках | | - Унифицируют проведение анализа | | | (импортные | | - Позволяют получать результаты | | | производители) | | высокого качества | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 16 | Реактив на | При постановке | Получение быстрого, четкого ответа | | | определение | оксидазного теста | при постановке реакции | | | оксидазы (импортные | | | | | аналоги СИБ) | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 17 | Бактериологические | Замена классических | Возможность получения ответа в | | | автоматизированные | бактериологических | более короткие сроки, сокращение | | | анализаторы | анализов | трудозатрат | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 18 | Биохимические | Проведение | Повышение надежности результата, | | | системы | идентификации до вида | исключение субъективизма | | | идентификации | | исследователя, сокращение | | | - с учетом | | трудозатрат | | | результатов по | | | | | кодовой книге | | | | | - | | | | | автоматизированные | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 19 | Очиститель воздуха | Вспомогательное | Способствует предотвращению | | | от микробных | оборудование для | загрязнения исследуемой пробы | | | аэрозолей | обеспечения требуемого | на этапах анализа | | | | качества помещений для | | | | | бактериологического | | | | | анализа | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 20 | Устройство для | Забор воздуха для | Повышение надежности результата | | | забора воздуха | контроля | | | | аспирационным путем | обсемененности | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 21 | Автоматизированный | Контроль | Повышение объективности контроля, | | | регистратор | температурного режима | круглосуточная регистрация | | | температур | | температурного режима для оценки | | | (термостатов, | | его влияния на результаты анализа и | | | холодильников) | | работы оборудования | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 22 | Автоматические | При работе с пипеткой | Предотвращение контаминации | | | пипетторы (с | в бактериологической | посевного материала, безопасность | | | аккумулятором) | лаборатории | исследователя, удобство в работе | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 23 | Мобильный | При невозможности | Безопасность работы, бесшумность | | | адсорбционный шкаф | установки | | | | при работе с | стационарного | | | | летучими | вытяжного шкафа | | | | химическими | | | | | веществами | | | | | (хлороформом) | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 24 | Водяные бани с | Поддержание | Качество анализа, снижение | | | регулятором | температуры сред и | трудозатрат | | | температуры | растворов | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 25 | Низкотемпературный | Длительное хранение | Качество результата анализа | | | холодильник (-70 | культур | | | | град.C) | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 26 | Лабораторная | Мытье посуды | Качественное мытье лабораторной | | | посудомоечная | | посуды | | | машина (западных | | | | | производителей) | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 27 | Автоклавы с | Стерилизация сред и | Качество питательных сред, | | | программируемыми | посуды деструкции | оптимальная организация и | | | режимами работ | отработанного | безопасность работ | | | | материала | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 28 | Сухожаровые шкафы с | Стерилизация | Оптимальная организация работ | | | программируемыми | материалов | | | | режимами работ | | | |----|---------------------|------------------------|-------------------------------------| | 29 | Электронный счетчик | Качественный и | Сокращение трудозатрат, повышение | | | клеток (типа Stat | количественный | точности учета численности | | | Count) | гидробиологический | гидробионтов | | | | анализ | | ------------------------------------------------------------------------------------------- Приложение 12 (справочное) Приведено по ISO 9998:1991 (E) ПРИЛОЖЕНИЕ К ISO 9998:1991 (E) (НОРМАТИВНОЕ). ТЕСТ НА ОСТАТКИ ИНГИБИТОРОВ НА ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЕ Введение Некоторые смачивающие агенты или детергенты, используемые при мытье лабораторной посуды, могут содержать бактериостатические или ингибирующие вещества, для полного удаления следов которых и для обеспечения полной чистоты от остатков бактериостатического действия требуется от 6 до 12 последовательных ополаскиваний. Выполняйте этот тест раз в год и перед тем как пользоваться вновь поставленным детергентом. Если пользоваться предварительно вымытой и стерилизованной пластиковой посудой, необходимо проверить ее на остатки ингибиторов. Порядок действий Соблюдая обычные правила мытья лабораторной посуды, вымойте 6 чашек Петри и обозначьте их как группу А. Точно так же вымойте 6 чашек Петри, прополощите их 12 раз свежими порциями дистиллированной воды и обозначьте как группу Б. Прополощите шесть чашек Петри водой с добавкой детергента в обычной концентрации и высушите их, не ополаскивая. Обозначьте как группу В. Чашки Петри всех трех групп простерилизуйте так, как это обычно делается. Для проверки предварительно стерилизованной пластиковой посуды создайте группу Г из шести стерильных чашек Петри. Добавьте не более 1 мл микробной взвеси, содержащей от 50 до 150 КОЕ, и действуйте в соответствии с процедурой, описанной для подсчета организмов при гетеротрофном посеве (ISO 8199). Если получить подходящий образец трудно, сделайте посев, равный 0,1 мл, в три чашки из каждой группы, а в другие три чашечки каждой группы - посев, равный 1,0 мл. Интерпретация результатов Различия средней численности колоний в посевах в чашках групп А, Б, В и Г, составляющие менее 15%, показывают, что детергент не токсичен и не имеет ингибирующих характеристик или предварительно стерилизованные чашечки пригодны для проведения исследований. Если среднее количественное выражение численности колонии в посуде группы А по меньшей мере на 15% ниже аналогичного показателя для посуды группы В, то посуда группы А и после промывки содержит остатки ингибиторов. Если среднее количественное выражение колонии в посуде группы Г по меньшей мере на 15% ниже аналогичного показателя для посуды группы Б, то в прошедшей предварительную стерилизацию чашечке содержатся остатки ингибиторов. Различие между средними величинами, полученными при подсчете колоний в посуде групп А и Б, составляющее менее 15%, и аналогичное различие между колониями в посуде групп А и В, составляющее более 15%, указывают на то, что детергент обладает ингибирующими свойствами, которые устраняются при стандартном мытье лабораторной посуды. |