4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЭКСПРЕСС-МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ, ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ПОДЗЕМНЫХ ИСТОЧНИКОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Методика. Министерство здравоохранения РФ. 18.01.99 1100/83-99-23

7. Подготовка к выполнению измерений

     7.1.  Прибор ЛИК готовят к работе в соответствии с инструкцией по
эксплуатации.
     7.2. Приготовление рабочего реактива.
     В  чистую  пробирку  пипеточным  дозатором  наливают  0,2 куб. см
3%-ной водной перекиси водорода и прибавляют к ней 6,0 +/- 0,1 куб. см
реактива.
     Приготовленный  рабочий  реактив  годен  для анализа в течение 24
часов с момента его приготовления.
     7.3.  Приготовление исходных разведений чистых культур E.coli или
Вас.  subtilis  (Вас. cereus) для построения градуировочного графика в
диапазоне концентраций клеток от 10 до 100 КОЕ/куб. см.
     С  косячка  или из чашки Петри с помощью петли (крючка) переносят
колонию  чистой  культуры  в  стерильную  пробирку  с  соблюдением мер
стерильности и добавляют в нее стерильный физраствор объемом 10,0 куб.
см. Содержимое тщательно перемешивают до исчезновения видимых сгустков
и фильтруют через 3-слойный марлевый стерильный фильтр.
     После   фильтрации  исходного  разведения  с  помощью  стандартов
мутности  или  камеры  Горяева-Тома  определяют  исходную концентрацию
бактериальных клеток.
     Готовят серию разведений с соблюдением мер стерильности следующим
образом.  От  исходного  разведения  отбирают  2,0  +/-  0,1  куб. см,
помещают  в  стерильную пробирку и добавляют в нее 2,0 +/- 0,1 куб. см
стерильного  физраствора.  Пробирку  закрывают  пробкой  и  содержимое
перемешивают  встряхиванием  в  течение 3-х минут. Аналогичным образом
готовят  все  остальные разведения до конечной концентрации, равной 10
+/- 5 КОЕ/куб. см.
     7.4. Построение градуировочного графика.
     7.4.1.   Определение  фона  (сигнала)  от  стерильного  раствора.
Передвигают    крышку   прибора   ЛИК   до   упора   вперед,   снимают
крышку-дозатор,  наливают  в  кювету  из  стекла  0,3 куб. см рабочего
реактива,  устанавливают  кювету  с  реактивом  в  реакционную  камеру
прибора и закрывают ее крышкой-дозатором.
     В  полость  крышки-дозатора  наливают  0,1  куб.  см  стерильного
физраствора,  крышку  прибора передвигают до упора назад и нажимают на
нее рукой.
     С  индикатора прибора снимают показания и записывают их в рабочий
блокнот.  Операцию  повторяют  3  раза,  вычисляют  среднее значение и
записывают полученный результат в рабочий журнал.
     7.4.2. Анализ разведения бактериальной культуры.
     Анализ приготовленного разведения бактериальной культуры начинают
с  разведения,  содержащего  10 +/- 5 КОЕ/куб. см, и проводят в той же
последовательности, как указано в п. 7.4.1.
     Внимание!!!
     Реактив  и  разведения  бактериальной  культуры  отбирать разными
наконечниками дозатора пипеточного во избежание загрязнения реактива.
     По  окончании  анализа разведения культуры из вычисленных средних
значений  показаний  прибора  вычитают показания фона от физраствора и
получают истинные значения хемилюминесцентного анализа.
     7.4.3. Построение градуировочного графика.
     Градуировочный   график   строят   на   миллимитровой   бумаге  в
координатах:   величина  измеренного  сигнала  -  концентрация  клеток
бактерий  в  анализируемом  разведении.  В последующем график уточняют
после   поверки   (ремонта)   прибора   или  по  усмотрению  (желанию)
специалиста-микробиолога.