МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ. МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ (ГМИ) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКОГО МИКРОЧИПА МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 06.03.04 МУК 4.2.1903-04

8. Обработка результатов анализа

     8.1.   Визуализацию  гибридизационной  картины  на  биологическом
микрочипе    для    анализируемой   пробы   осуществляют   с   помощью
аппаратно-программного    комплекса    для    анализа    флуоресценции
биологических микрочипов "Чипдетектор-03" [2] и компьютерной программы
Imageware [1].
     8.2. Полученную на экране компьютера гибридизационную картину для
анализируемой   пробы   сравнивают  с  гибридизационной  картиной  для
положительного  контроля (заведомо трансгенной ДНК) и гибридизационной
картиной  для  отрицательного  контроля  (заведомо нетрансгенной ДНК).
Пример  гибридизационной  картины  флуоресцентных  продуктов  амПЦР  в
гелевых  ячейках  биологического  микрочипа  приведен  в прилож. В (не
приводится).  Наличие  высокого  уровня специфического флуоресцентного
сигнала   в   гелевых  ячейках  биологического  микрочипа,  содержащих
иммобилизованные   олигонуклеотиды   (для   промоторов   35S   и  nos,
терминатора  ocs, генов gus или npt II), свидетельствует о присутствии
конкретных  чужеродных  последовательностей ДНК в анализируемой пробе,
т.е.  о трансгенности анализируемой ДНК. Низкий уровень флуоресцентных
сигналов    в   гелевых   ячейках   биологического   микрочипа   после
гибридизации, сравнимый с уровнем фоновой флуоресценции отрицательного
контроля,   но   не  выше  установленного  порога  чувствительности  в
программе  Imageware,  указывает  на  отсутствие конкретных чужеродных
последовательностей  ДНК в анализируемой пробе, т.е. о нетрансгенности
анализируемой ДНК.
     8.3. Интерпретация результатов.
     8.3.1.  Высокий  уровень флуоресценции одной, нескольких или всех
пяти    гелевых    ячеек    биологического    микрочипа,    содержащих
иммобилизованные  олигонуклеотиды,  превышающий  заданный  в программе
Imageware   [1]  порог  чувствительности,  свидетельствует  о  наличии
генетически   модифицированных   источников   (ГМИ)   в  анализируемом
продукте.
     8.3.2.  Низкий  уровень  флуоресценции  всех  пяти  гелевых ячеек
биологического микрочипа, содержащих иммобилизованные олигонуклеотиды,
близкий   к   фоновой   флуоресценции  отрицательных  контролей  и  не
достигающий  заданного  в программе Imageware порога чувствительности,
свидетельствует  об отсутствии генетически модифицированных источников
(ГМИ) в анализируемом продукте.
     8.3.3.   Высокий   уровень   флуоресценции   гелевых   ячеек  при
использовании  заведомо  нетрансгенной ДНК свидетельствует о получении
ложноположительного  результата.  Причиной  может быть загрязнение ГМИ
реактивов  и/или  оборудования.  В  этом  случае необходимо обработать
поверхности  лабораторных  столов  и  оборудования  раствором  соляной
кислоты  (1  моль/куб. дм), заменить реактивы на свежеприготовленные и
повторить  анализ.  Полученный  при  повторном  анализе низкий уровень
флуоресценции  гелевых  ячеек при использовании заведомо нетрансгенной
ДНК   свидетельствует   о  достоверном  результате,  который  является
окончательным.
     8.3.4.  Низкий  уровень  (отсутствие) флуоресцентного сигнала при
использовании  заведомо  трансгенной  ДНК  свидетельствует о получении
ложноотрицательного  результата. Причиной могут быть потеря активности
одного  из  компонентов  реакционной  смеси для амПЦР или несоблюдение
условий   проведения   амПЦР   и/или   гибридизации  на  биологическом
микрочипе.   В   этом   случае   необходимо   заменить   реактивы   на
свежеприготовленные  и  повторить  анализ.  Полученный  при  повторном
анализе  высокий уровень флуоресценции гелевых ячеек при использовании
заведомо  трансгенной  ДНК  свидетельствует  о достоверном результате,
который является окончательным.