МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ (ГМО) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧ. Методика. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 17.10.05 МУК 4.2.2008-05

9. Проведение ферментного анализа

     9.1. Исходный стрептавидин-пероксидазный конъюгат разбавить в 200
раз буфером 1хSSC, содержащим 1% BSA (бычий сывороточный альбумин), из
расчета  25 куб. мм на микрочип. Например, необходимо проанализировать
5  микрочипов.  Для  этого  потребуется  25 х 5 = 125 куб. мм раствора
конъюгата.  Готовят  с  небольшим  избытком, 150 куб. мм раствора. Для
этого  1,5  мг  BSA  растворяют в 150 куб. мм 1хSSC, а затем добавляют
0,75 куб. мм исходного конъюгата.
     9.2.  Нанести  25  - 30 куб. мм разведенного конъюгата на рабочую
зону  микрочипа  и  поместить  его  на  30 минут во влажную камеру при
комнатной температуре.
     9.3. Смыть конъюгат раствором 1хSSC.
     9.4. Залить микрочип раствором 2xSSC и промыть 5 минут.
     9.5. Промыть микрочип раствором 1хSSC.
     9.6.   Непосредственно   перед  применением  приготовить  раствор
субстрата  - диаминобензидина (ДАБ). Для этого растворить таблетку ДАБ
в  1  куб.  см  буфера  0,1хSSC,  добавить 30 куб. мм 3%-ного раствора
пероксида водорода и перемешать. Раствор использовать немедленно.
     9.7.   Залить   рабочую  зону  микрочипа  раствором  субстрата  и
выдержать  от  2  до  10  минут  при  комнатной  температуре. В случае
положительной   реакции   появляются   коричневые   пятна  окисленного
субстрата.
     9.8. Промыть  микрочип  дистиллированной водой,  встряхнуть капли
воды и поместить в термостат 42 град.С на 5 - 10  минут.  После  сушки
микрочип с окрашенными зонами необходимо хранить в темном месте.