МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ (ГМО) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧ. Методика. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 17.10.05 МУК 4.2.2008-05

8. Проведение ДНК гибридизации

     8.1.  Приготовить  рабочие  разведения раствора 20xSSC (3 М NaCl,
0,3  М цитрат натрия, рН 7,4): 2xSSC, 0,l% SDS; 0,lxSSC; 0,lxSSC, 0,1%
SDS;   0,01xSSC.   Для   приготовления  100  куб.  см  раствора  можно
воспользоваться таблицей 2.

                                                             Таблица 2

                 ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ SSC

------------------------------------------------------------------
|      Раствор      |    20хSSC   |  10%-ный SDS   |  Н О дист.  |
|                   |             |                |   2         |
|-------------------|-------------|----------------|-------------|
|2xSSC, 0,1% SDS    |10 куб. см   |1 куб. см       |89 куб. см   |
|-------------------|-------------|----------------|-------------|
|0,1хSSC            |0,5 куб. см  |-               |99,5 куб. см |
|-------------------|-------------|----------------|-------------|
|0,1xSSC, 0,1% SDS  |0,5 куб. см  |1 куб. см       |98,5 куб. см |
|-------------------|-------------|----------------|-------------|
|0,01хSSC           |0,05 куб. см |-               |99,95 куб. см|
------------------------------------------------------------------

     8.2. Микропробирки с продуктами амплификации ДНК центрифугировать
1 - 2 секунды для сбора пробы на дне пробирки и держать далее только в
вертикальном  положении.  Добавить  в  каждую  микропробирку 5 куб. мм
20хSSC  и  0,2  куб.  мм  10% SDS, перемешать и центрифугировать 1 - 2
секунды.  Распределить  полученную  смесь  по  поверхности  микрочипа,
содержащей зоны иммобилизованных олигонуклеотидов.
     8.3.  Поместить  микрочип  во  влажную  камеру (например, в чашку
Петри   со  смоченным  дистиллированной  водой  бумажным  фильтром)  и
поставить на 1 час в воздушный термостат с температурой 42 град.С.
     8.4.  По  окончании реакции капли смыть буфером 2хSSC, 0,1% SDS и
затем тщательно промыть чип следующими растворами:
     - 2xSSC, 0,l% SDS - 1 раз 5 минут;
     - 0,1хSSC, 0,1% SDS - 2 раза по 5 минут;
     - 0,1хSSC - 5 раз по 1 минуте;
     - 0,01хSSC в течение 10 секунд.