Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ (ГМО) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧ".
7. Амплификация
7.1. Перед проведением реакции вынуть из холодильника необходимое
количество микропробирок с сухими реагентами из набора реагентов.
Промаркировать соответствующим образом: "-" контроль", "исследуемые
пробы", "+" контроль".
7.2. Добавить во все пробирки по 5 куб. мм праймеров.
7.3. Добавить во все пробирки по 10 куб. мм растворителя.
7.4. В пробирку, которая служит отрицательным контролем, добавить
5 куб. мм бидистиллированной воды. В опытные пробирки добавить по 5
куб. мм исследуемой ДНК. В пробирку с положительным контролем добавить
5 куб. мм раствора контрольной ДНК.
7.5. Добавить во все пробирки по 20 куб. мм минерального масла
(масло не используется в случае, если амплификатор имеет
термостатируемую крышку).
7.6. Подготовленные для проведения реакции пробирки перенести в
термоблок программируемого термостата и запустить программу
амплификации в соответствии с режимами, приведенными в таблице 1.
Таблица 1
ПРОГРАММА ПРОВЕДЕНИЯ АМПЦР
------------------------------------------------------------------
| Шаг программы |Температура | Время | Количество |
| |град. С |инкубации, сек.| циклов |
|-----------------|---------------|---------------|--------------|
|1. |94 |180 |1 |
|-----------------|---------------|---------------|--------------|
|2. |94 |30 |42 |
|-----------------|---------------|---------------| |
|3. |62,5 |30 | |
|-----------------|---------------|---------------|--------------|
|4. |72 |180 |1 |
------------------------------------------------------------------
Примечание: Для пипетирования жидкостей без примесей
рекомбинантной ДНК (праймеры, растворитель, вода) необходимо иметь
отдельный комплект микродозаторов, не используемых при пробоподготовке
или работах с ДНК-содержащими препаратами. При подготовке смесей для
проведения амПЦР каждую пробирку открывают только перед отбором или
внесением проб, а по окончании манипуляции сразу же закрывают.
Запрещается открывать одновременно несколько микропробирок с пробами и
оставлять их открытыми на длительное время.
7.7. После завершения реакции микропробирки необходимо передать в
помещение, в котором будет проводиться гибридизация. Отбор пробы для
гибридизации проводится из-под слоя минерального масла, в случае его
использования.
7.8. Подготовка проб для амПЦР и их гибридизации с применением
ферментного анализа на биологическом микрочипе в одном помещении не
допускается. Реакционные смеси после амплификации содержат в высоких
концентрациях фрагменты ДНК, контаминация которыми помещений,
оборудования и реактивов может привести к получению ложноположительных
результатов.
|
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ (ГМО) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧ".