Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ".
6. Подготовка и обработка почвы для анализа
Для приготовления среднего образца объемом 0,5 кг почву всех
образцов одного участка высыпают на стерильный, плотный лист бумаги,
тщательно перемешивают стерильным шпателем, отбрасывают камни и прочие
твердые предметы. Если проба почвы однородна, допускается тщательное
перемешивание почвы в банке. Затем почву распределяют на листе ровным
тонким слоем в форме квадрата.
Диагоналями почву делят на 4 треугольника. Почву из двух
противоположных треугольников отбрасывают, а оставшуюся вновь
перемешивают, опять распределяют тонким слоем и делят диагоналями и
так до тех пор, пока не останется примерно 0,5 кг почвы.
Перед посевом почву просевают через сито диаметром 3 мм. При
просеивании сито покрывают сверху стерильной бумагой. Почву дисперсную
можно не подвергать просеиванию, почву торфяную, содержащую большое
количество органических веществ, предварительно растирают в ступке.
Неперегнившую растительную массу отбрасывают.
Образец почвы тщательно перемешивают и из него отбирают навески,
величины которых выбираются исходя из предполагаемой степени
загрязнения почвы и планируемых определений. Для учета почвенных
микроорганизмов достаточно навески от 1 до 10 г. В навеску почвы
добавляют небольшое количество стерильной водопроводной воды до
получения пастообразного состояния почвы, растирая ее в течение 5
минут. Из суспензии делают раститровку. Первое разведение навески
почвы (1:10) делают в стерильной посуде, добавляя к суспензии
стерильную водопроводную воду в соотношении 1:9 к весу почвы
(например: 1 г почвенной суспензии разводят в 9,0 куб. см стерильной
водопроводной воды, 10 г почвы - в 90,0 куб. см воды и т.д.). После
приготовления разведений применяют соответствующую предварительную
обработку почвы в зависимости от типа и вида учитываемого
микроорганизма. Основная цель, которую преследуем, проводя
предварительную обработку почвы, заключается в том, чтобы извлечь
клетки микроорганизмов из почвенных агрегатов, что достигается
разрушением последних и десорбцией микроорганизмов с поверхности
почвенных частиц.
Основными приемами предварительной обработки почвы являются:
1) 10-минутное вертикальное встряхивание почвенной суспензии
первого разведения в пробирках с резиновыми пробками - при навеске
почвы 1 г;
2) 3-минутная обработка почвенной суспензии первого разведения на
мешалке механического диспергатора - при навеске почвы более 1 г.
Почвенную суспензию, содержащую в 1,0 куб. см 0,1 г почвы, через
30 секунд после предварительной обработки (за это время оседают грубые
минеральные частицы) используют для приготовления последовательно
убывающих концентраций почвы. Дня этого из первого разведения,
1
находящегося во флаконе, с содержанием почвы 0,1 г (10 ) отбирают
стерильной пипеткой 1,0 куб. см и переносят в пробирку с 9,0 куб. см
стерильной водопроводной воды. При этом получают второе разведение,
2
содержащее 0,01 г/куб. см (10 ) почвы. Повторяя эту операцию, доводят
4 5
разведение почвы до 0,0001 - 0,00001 г/куб. см. (10 - 10 ). Для
приготовления каждого разведения используют отдельные пипетки.
Приготовленные разведения используются для посева на различные
питательные среды, а также для учета численности микроорганизмов
методом прямой микроскопии.
|
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ".