3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИННЫМ ШТАММАМ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. Не задано. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 12.02.07 МУ 3.3.1.2161-07

5.11. Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ)
         спонтанная и под влиянием Т- и В-клеточных митогенов

                                                         6
     Для спонтанной РБТЛ суспензию спленоцитов  (5  х  10  кл./мл)  на
"среде культивирования" (среда RPMI-1640, содержащая 10% эмбриональной
                                                                  -5
телячьей сыворотки,  1  мМ  буфера HEPES, 2 мМ L-глютамина, 5 х 10   М
2-меркаптоэтанола,  100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина)
разливают  в 96-луночную пластиковую панель по 200 мкл в лунку (по три
лунки на каждый образец) и инкубируют в СО -инкубаторе (5%  СО  )  при
                                          2                   2
                                                          3
температуре 37  град.С  в течение  72 ч.  Затем добавляют  Н-тимидин в
объеме 25 - 50 мкл в среде RPMI-1640 на лунку и инкубируют  в  тех  же
условиях  еще  16  - 24 ч.  По окончании инкубации клетки переносят на
фильтры с помощью прибора  "Cell  Harwestr",  фильтры  после  сушки  в
термостате  при температуре 37 град.С помещают во флаконы,  содержащие
по 3 мл сцинтилляционной жидкости (на 1 л толуола 0,2 г РОРОР  и  5  г
РРО).
     Реакция бласттрансформации   лимфоцитов   под   влиянием   Т-   и
В-клеточных митогенов  служит  для  оценки  функциональной  активности
лимфоцитов.  Специфическое распознавание митогена индуцирует в клетках
пролиферацию,  т.е.  деление  клеток.  Некоторые  митогены  селективно
стимулируют   различные   субпопуляции   лимфоцитов.   Например,  КонА
стимулирует тимоциты,  зрелые и  незрелые  Т-клетки,  ФГА  стимулирует
пролиферацию    только    зрелых   Т-клеток.   Такие   митогены,   как
липополисахарид и бактериальный липопротеин,  стимулируют пролиферацию
В-клеток.  Благодаря  этой селективности митогены могут использоваться
для характеристики функционального  состояния  различных  субпопуляций
иммунокомпетентных клеток.
     Постановку РБТЛ под влиянием митогенов осуществляют так  же,  как
спонтанную,  только  в  опытные  лунки  добавляют  Т-  или В-клеточные
митогены  (не  менее  3  лунок  на  каждый  митоген)   в   оптимальной
стимулирующей дозе (КонА 1 - 15 мкг/мл,  ФГА 10 - 15 мкг/мл,  ЛПС 15 -
100  мкг/мл).  Контролем  служат  лунки  с  взвесью   лимфоцитов   без
добавления митогенов.
     Учет результатов.
     Радиоактивность (имп./мин.)    образцов    измерить   с   помощью
бета-счетчика.  Учет  реакции  можно  проводить  визуально,  определяя
процент  бластных  форм  лимфоцитов.  Результаты  представляют  в виде
индексов стимуляции клеток (ИСК), которые подсчитывают по формуле:

                    имп./мин. в культуре с митогеном
              ИСК = ---------------------------------.
                    имп./мин. в культуре без митогена

     Результаты определений отражают в таблице:

-----------------------------------------------------------------------
|     Сутки     | N         |    Стимуляция Т-системы    | Стимуляция |
|               | животного |                            |  В-системы |
|               |           |----------------------------|------------|
|               |           |  ФГА  |р с К |Con А |р с К |  ЛПС |р с К|
|---------------|-----------|-------|------|------|------|------|-----|
|7              |           |       |      |      |      |      |     |
|---------------|-----------|-------|------|------|------|------|-----|
|14             |           |       |      |      |      |      |     |
|---------------|-----------|-------|------|------|------|------|-----|
|28             |           |       |      |      |      |      |     |
|---------------|-----------|-------|------|------|------|------|-----|
|Контроль (К)   |           |       |      |      |      |      |     |
-----------------------------------------------------------------------