ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУ 2.3.2.1830-04. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 09.01.04 МУ 2.3.2.1830-04

4.5.2. Сущность метода

     В каждый опыт берут не менее 3 крольчат.  Животных  фиксируют  на
специальном  столе  и внутримышечно во внутреннюю область бедра вводят
тиопентал натрия (0,1 мл 1%-ного раствора на  50  г  веса  животного).
Наркотический  эффект  наступает через 2 - 3 минуты.  По средней линии
живота крольчонка делают разрез брюшины по  1  см  в  обе  стороны  от
пупка.  Извлекают  петли  дистального отдела тонкого кишечника и в его
просвет на расстоянии 3 - 5 см от уровня верхушки аппендикса, имеющего
общую брыжейку с подвздошной кишкой, вводят с помощью иглы шприца (1,0
                                                      8
куб.  см)  0,1  мл  микробной  взвеси,  содержащей  10  КОЕ/куб.   см.
Одновременно делают 10-кратные разведения взвеси ГММ и из 3,  4 и 5-го
разведений производят посевы по 0,5 мл на плотную  питательную  среду,
делая параллельные высевы по 2 чашки Петри на каждое разведение.
     Через 1,5  часа  после  заражения животных усыпляют хлороформом и
вскрывают.  Отступя 5 -  7  см  от  слепой  кишки,  извлекают  участок
подвздошной  кишки  длиной  20  см  и  переносят в чашку Петри.  Чтобы
предупредить  элиминацию  ГММ  со  слизистой   кишечника   исследуемый
материал  помещают  на лед и дальнейшие процедуры проводят оперативно.
Отрезки кишечника разрезают вдоль,  трижды промывают в охлажденном при
4 град. С растворе 0,9%-ного хлористого натрия, растирают в ступке или
специальном гомогенизаторе. К растертой ткани добавляют 1 мл 0,9%-ного
раствора   хлористого  натрия,  и  полученные  суспензии  переносят  в
пробирки,  и делают 10-кратные разведения.  Из 3,  4,  5-го разведений
делают   посевы   по  0,5  мл  на  плотную  питательную  среду,  делая
параллельные высевы по 2 чашки Петри на каждое разведение.  Через 18 -
24  часа после инкубации при температуре,  оптимальной для выращивания
исследуемого  вида   ГММ,   подсчитывают   число   выросших   колоний,
изолированных    со    слизистой   тонкого   кишечника   и   высеянных
непосредственно из  пробирки  до  заражения  кроликов.  Таким  образом
определяется число ГММ, прикрепившихся к слизистой тонкого кишечника.