ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУ 2.3.2.1830-04. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 09.01.04 МУ 2.3.2.1830-04

4.7.2. Сущность метода

    Из выращенных на плотных или жидких питательных средах контрольных
штаммов и ГММ,  штамма-реципиента и референтного штамма того же  вида,
что   и   ГММ,   готовят   взвеси   микроорганизмов   с  определенными
концентрациями  КОЕ/мл.  Далее  готовят   ряды   пробирок   с   жидкой
питательной средой по 3 мл,  на которой способны расти все исследуемые
микроорганизмы (например, триптиказо-соевый или L-бульон), и вносят по
           1      3     5
0,5  мл  10  ,  10  и 10  КОЕ/куб. см ГММ и такое же количество клеток
контрольного   штамма   (например,   Bifidobacterium).    Одновременно
осуществляют посевы на селективные питательные среды в разведениях для
точного подсчета клеток каждого  вида  микроорганизма.  Например,  для
точного  подсчета количества клеток стафилококков посев осуществляется
на желточно-солевой агар при дальнейшем культивировании при 37 град. С
в течение 48 часов в аэробных условиях, в то время как для определения
количества клеток бифидобактерий взвесь микроорганизмов высевается  на
модифицированную   среду  Блоурока,  а  культивирование  производят  в
анаэробных условиях при 37 град. С в течение 48 часов.
     Через 6 и 24 часа осуществляют посевы на селективные  питательные
среды и подсчитывают число клеток представителя резидентной микрофлоры
и  ГММ.  Контролями  служат  посевы,  в  которых  выращивается  только
представитель резидентной микрофлоры или ГММ. Вычисляется число клеток
представителя резидентной микрофлоры,  выращенного в присутствии ГММ и
отдельно.  При  приблизительно  одинаковом  соотношении числа выросших
клеток отдельно и в присутствии ГММ можно считать, что ГММ не обладает
антагонистическим  действием.  При  более  высоких  показателях  числа
выросших  клеток  обоих  видов,  чем  при   выращивании   каждого   из
представителей  в  отдельности,  можно  констатировать,  что  оба вида
характеризуются симбиотическим действием.  При  превышении  количества
клеток   представителя   резидентной  микрофлоры  в  5  и  более  раз,
выращенного  без  ГММ,   чем   в   смеси   с   ГММ,   можно   полагать
антагонистическое действие ГММ на конкретного представителя нормальной
микрофлоры кишечника.  В случае, если такое антагонистическое действие
ГММ   проявляется   ко   всем   или   большинству   из   исследованных
представителей  нормальной  микрофлоры  кишечника  человека,  делается
заключение  о  невозможности  его использования в производстве пищевых
продуктов.  При выявлении антагонистического действия  ГММ  к  1  -  2
представителям  нормальной  микрофлоры  кишечника  человека  требуются
дополнительные исследования, включающие исследование антагонистической
активности  ГММ  и  штамма-реципиента  с  представителями  резидентной
микрофлоры  кишечника  человека  in   vivo,   молекулярно-генетические
исследования по выявлению генов, детерминирующих данный феномен.