МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 15.01.02 МУ 4.2.1097-02

Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".

Предыдущий фрагмент <<< ...  Оглавление  ... >>> Следующий фрагмент

Полный текст документа

6.4. Тесты дифференциации биоваров холерных
                             вибрионов O1
     
     Определение чувствительности к диагностическим холерным фагам.
     В лабораторной   диагностике   холеры   используют   бактериофаги
диагностические холерные классический и эльтор. При оценке результатов
проб с фагами необходимо ориентироваться  на  диагностический  рабочий
титр  (ДРТ),  который  обычно  обозначают  на  этикетках.  Определение
чувствительности к фагам проводят как с цельными препаратами,  так и с
их   10-кратными   разведениями   до   ДРТ  в  мясопептонном  бульоне.
                                            -2
Дифференциальный рабочий титр не ниже 1 х 10  .
     Для постановки реакции в чашки  разливают  щелочной  агар.  После
застывания агара и подсушивания его в течение 30 мин.  при температуре
37 ёC дно чашек делят на  квадраты  по  количеству  образцов  фагов  и
10-кратных  разведений  фага.  В пробирку с 5 мл 0,5 - 0,7-процентного
питательного агара,  расплавленного и охлажденного до 45 ёC, добавляют
0,1  - 0,2 мл 3 - 4-часовой бульонной культуры,  тщательно смешивают и
выливают  на  поверхность  агара.  Чашки   оставляют   при   комнатной
температуре  с  приоткрытыми  крышками  на  30 мин.  В центр квадратов
наносят штампом-репликатором,  стандартной петлей или тонко  оттянутой
пастеровской  пипеткой  по  капле фагов в соответствующих разведениях.
После подсыхания капель чашки переворачивают вверх дном и  помещают  в
термостат  при  температуре  (37,0  +/- 0,5) ёC.  Результаты учитывают
через 3 - 4 и 18 - 20 ч.  Наличие лизиса в виде  одного  "стерильного"
пятна   или   группы   мелких   негативных   колоний  оценивается  как
положительный результат.
     Определение чувствительности к полимиксину В.
     В расплавленный и остуженный до 45 ёC питательный  агар  (рН  7,2
+/-  0,1)  добавляют  полимиксин В из расчета 50 единиц на 1 мл среды.
После тщательного перемешивания среду  разливают  в  чашки  Петри.  На
застывшие агаровые пластинки наносят обычной бактериологической петлей
18- или  3-часовую  бульонную  культуру.  Результаты  учитывают  после
инкубирования  посевов при температуре 37 ёC в течение 18 ч.  Холерные
вибрионы биовара cholerae  не  растут  на  полимиксиновом  агаре,  для
холерных вибрионов биовара eltor - признак вариабелен.
     Постановка реакции гемагглютинации.
     На предметное стекло в чашке Петри помещают каплю 0,9-процентного
раствора  хлорида  натрия  и  суспендируют  в  ней  петлей  18-часовую
агаровую культуру. Затем добавляют каплю 2,5-процентной взвеси куриных
эритроцитов,  трижды отмытых 0,9-процентным раствором хлорида  натрия.
Стекло  покачивают  до смешивания взвеси эритроцитов и вибрионов.  При
положительной  реакции  в  течение   1   мин.   наступает   склеивание
эритроцитов.   Реакцию  сопровождают  двумя  контролями:  а)  в  каплю
0,9-процентного раствора хлорида натрия добавляют каплю 2,5-процентной
взвеси эритроцитов; б) в капле 0,9-процентного раствора хлорида натрия
суспендируют испытуемую культуру. Контроли должны быть отрицательными.
Для  постановки  пробы  могут  быть  использованы  эритроциты  морской
свинки.
     Постановка реакции Фогес - Проскауэра (на ацетилметилкарбинол).
     Испытуемую культуру засевают в глюкозофосфатный бульон  Кларка  и
инкубируют  при  температуре  (37,0  +/-  0,5) ёC в течение 1 - 3 сут.
Затем к 1  мл  культуры  добавляют  0,6  мл  6-процентного  спиртового
раствора  альфа-нафтола и 0,4 мл 40-процентного раствора едкого калия.
Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 1 ч.  При положительной
реакции среда окрашивается в розовый или ярко-красный цвет.
     

Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".

Предыдущий фрагмент <<< ...  Оглавление  ... >>> Следующий фрагмент

Полный текст документа