Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".
6.5. Тесты межвидовой дифференциации патогенных для человека вибрионов Определение галофильности вибрионов. Суточную агаровую культуру исследуемого штамма засевают в 1-процентную пептонную воду с 3-процентным раствором натрия хлорида. Через 3 - 4 ч инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC переносят строго по 1 капле выросшей культуры в пептонную воду без NaCl, с 7 и 10-процентным раствором натрия хлорида. Через 18 - 20 ч инкубации оценивают рост культур по помутнению среды. К негалофильным относятся V. cholerae и V. mimicus, для роста которых достаточны следовые количества соли в среде. Вибрионы остальных видов, за исключением некоторых штаммов V. fluvialis и V. metshnikovii, не растут в 1-процентной пептонной воде без добавления натрия хлорида и устойчивы к значительным его концентрациям. Определение способности вибрионов к росту при разных температурах. Способность вибрионов к росту при температуре 4; 20; 30; 35; 40; 45 и 50 ёC выявляют при посеве суточных культур в 1-процентную пептонную воду с 0,5% натрия хлорида для негалофильных вибрионов и с 1,5 - 2% натрия хлорида для галофильных вибрионов. Наличие роста оценивают визуально в сравнении с контролем. Наблюдают за посевами ежедневно в течение 2 недель. Определение нитратредуктазы. Суточную агаровую культуру засевают в 1 мл бульона Хоттингера с 0,1-процентного раствора азотно-кислого калия. После 2 суток инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC в посевы добавляют 0,5 мл реактива Грисса. В положительных случаях среда сразу же окрашивается в красный цвет. К 1 - 2-суточной культуре в бульоне Хоттингера с 0,1% KNO3 добавляют 3 - 5 капель реактива, представляющего собой смесь равных объемов 0,1% раствора риванола в дистиллированной воде и 12-процентного раствора соляной кислоты. В случае положительной реакции бульон окрашивается в красный цвет. Определение бета-галактозидазы. Суточную агаровую культуру засевают на скошенную поверхность агара, содержащего 10% лактозы. Посевы инкубируют 1 - 2 суток при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC. Петлю выросшей культуры суспендируют в 0,25 мл 0,9% раствора натрия хлорида, добавляют 0,25 мл водного раствора О-нитрофенил-бета-D-галактопиранозита (ONPG) и помещают в термостат при (37 +/- 0,5) ёC. Реакцию учитывают через 20 мин., 1, 3 и 24 ч. В положительном случае взвесь приобретает желтую окраску, отрицательном - остается бесцветной. |
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".