МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ (ГМИ) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ.. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 06.03.04 МУК 4.2.1902-04

6.1. Метод выделения ДНК с помощью СТАВ
                 (гексадецилтриметиламмониум бромид)

     Подготовка пробы (раствора ДНК)
     Навеску  исследуемого  продукта  массой  70  -  80 мг поместить в
микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл.
     Добавить 200 мкл лизирующего буфера с меркаптоэтанолом, тщательно
растереть пробу в пробирке пестиком.
     Добавить  еще  600  мкл  лизирующего  буфера  с меркаптоэтанолом,
перемешать на аппарате для встряхивания типа "Вортекс".
     Инкубировать при  65 град.C 40 - 60 мин.,  перемешать на аппарате
для   встряхивания,   центрифугировать   7    мин.    на    настольной
микроцентрифуге типа Эппендорф при частоте вращения 13000 об./мин.
     Перенести   супернатант   в   чистую   пробирку   типа  Эппендорф
вместимостью 1,5 мл.
     Добавить 400 мкл хлороформа, предварительно насыщенного водой.
     Перемешать   на  аппарате  для  встряхивания  типа  "Вортекс"  до
образования суспензии.
     Центрифугировать 7 мин. при частоте вращения 12000 об./мин.
     Перенести  верхнюю  фракцию  в  чистую  пробирку  типа  Эппендорф
вместимостью   1,5  мл,  не  захватывая  слой  хлороформа.  Экстракцию
хлороформом повторить.
     Центрифугировать 7 мин. при частоте вращения 12000 об./мин.
     Перенести  верхнюю  фракцию  в  чистую  пробирку  типа  Эппендорф
вместимостью 1,5 мл, не захватывая слой хлороформа.
     Добавить  600  мкл  изопропилового спирта, взятого из морозильной
камеры (минус 20 град.C), перемешать.
     Поместить пробирку в морозильную камеру (минус 20 град.C)  на  30
мин., не менее. В морозильной камере можно оставить на ночь.
     Центрифугировать 6 мин. при частоте вращения 12000 об./мин.
     Тщательно удалить верхний слой.
     Осадок  промыть  200  мкл 70%-ного этилового спирта (2 - 3 раза),
каждый  раз  перемешивая  на аппарате для встряхивания типа "Вортекс",
центрифугировать   6   мин.   при   частоте  вращения  12000  об./мин.
(суспендированный  в  70%-ном этаноле образец можно оставить на ночь в
морозильной камере при минус 20 град.C).
     Последний раз тщательно до последней капли удалить спирт.
     Подсушить осадок 5 мин. при 65 град.C для удаления капель спирта.
     Растворить осадок в 50 - 100 мкл деионизированной воды, осторожно
встряхивая.
     Полученный  раствор  ДНК  готов  для  проведения ПЦР, хранить при
минус 20 град.C (допустимо неполное растворение осадка).