Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ (ГМО) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧ".
3. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы
3.1. Аппаратура и инструменты.
3.1.1. Амплификатор ДНК типа "Терцик-мс-2" под микроцентрифужные
пробирки вместимостью 0,2, 0,5 куб. см со скоростью нагрева/охлаждения
активного элемента не менее 1,5 град.С/с ТУ 9642-001-4648062-98.
3.1.2. Комплекс аппаратно-программный для анализа биологических
микрочипов типа "ДЕГМИГЕН-001" ТУ 9443-001-02699501-2003.
3.1.3. Компьютерная программа "Аrrа" для анализа изображений,
полученных с помощью комплекса "ДЕГМИГЕН-001".
3.1.4. Биологический микрочип с иммобилизованными
олигонуклеотидами ТУ 4320-002-71321417-2004 (Приложение 1 А).
3.1.5. Термостат суховоздушный типа ТВ3-25 с рабочей температурой
42 град.С, рабочий диапазон от 20 град.С до 60 град.С, точность
поддержания температуры +/- 1 град.С ТУ 42-61961.
3.1.6. Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-01 2-го
класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности
однократного взвешивания не более +/- 0,0001 г.
3.1.7. Термостат типа "TERMO 24-15" под пробирки типа Эппендорф
вместимостью 0,5 и 1,5 мл, диапазон температур от 15 до 120 град.С,
количество гнезд - не менее 20 каждого типа, точность поддержания
температуры - 0,2 град.С, разность температур между соседними ячейками
- не более 0,5.
3.1.8. Камера морозильная по ГОСТ 26678-85, обеспечивающая
температуру минус 20 град.С.
3.1.9. Холодильник бытовой по ГОСТ 26678-85.
3.1.10. Микроцентрифуга настольная типа Эппендорф с частотой
-1
вращения не менее 13000 мин.
3.1.11. Аппарат для встряхивания типа "Вортекс", скорость
-1
вращения 250 - 3000 мин. .
3.1.12. Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной
воды по ГОСТ 6709-72.
3.1.13. Микродозаторы с переменным объемом дозирования: 0,5 -
10,0 куб. мм (шаг - 0,1 куб. мм, точность +/- 2,5% - 10,0%,
воспроизводимость 3% - 7%); 0,5 - 50,0 куб. мм (шаг - 0,5 куб. мм,
точность +/- 2,0% - 5,0%, воспроизводимость 2,5% - 5%); 20,0 - 200,0
куб. мм (шаг - 1,0 куб. мм, точность +/- 1,5% - 2,0%,
воспроизводимость 2% - 3%); 100 - 1000 куб. мм (шаг - 5 куб. мм,
точность +/- 1,0% - 1,5%, воспроизводимость 1% - 2%); 2000 - 10000
куб. мм (шаг - 10 куб. мм, воспроизводимость 1% - 2%).
3.1.14. Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 ТУ 16-535-84
или других видов.
Примечание: Допускается использование другой аппаратуры и
инструментов с аналогичными техническими характеристиками, разрешенных
для применения в установленном порядке.
3.2. Лабораторная посуда и материалы.
3.2.1. Бумага фильтровальная лабораторная ГОСТ 12026-76.
3.2.2. Воронки стеклянные ГОСТ 25336-82. Колбы стеклянные мерные
плоскодонные конические вместимостью 25, 50, 100, 200, 1000 куб. см,
ГОСТ 12738-77.
3.2.3. Чашки Петри по ГОСТ 25336-82.
3.2.4. Цилиндры стеклянные мерные лабораторные вместимостью 25,
100, 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.
3.2.5. Пробирки микроцентрифужные типа Эппендорф вместимостью
0,2; 0,5; 1,5 куб. см.
3.2.6. Наконечники с фильтром для дозаторов с переменным объемом
дозирования до 10; 20; 200; 1000; 10000 куб. мм.
3.3. Реактивы и реагенты.
3.3.1. Додецилсульфат натрия (SDS).
3.3.2. Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77.
3.3.3. Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), х.ч. ТУ
6-09-11-1721-83.
3.3.4. Альбумин бычий сывороточный сухой (БСА). Корпорация "Сигма
Алдрич" (Sigma), кат. N В 4287.
3.3.5. Спирт этиловый ректификованный ГОСТ Р 51652-00.
3.3.6. Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72.
3.3.7. Вода деионизованная ОСТ 11.029.003-80.
3.3.8. 3%-ный раствор пероксида водорода.
Примечание: Допускается использование других реактивов с
аналогичными техническими характеристиками; препараты импортного
производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000
или EN 29000.
3.3.9. Набор реагентов для выявления и идентификации ГМО
растительного происхождения на биологическом микрочипе состоит из
набора для выделения ДНК, набора для проведения амПЦР и набора для ДНК
гибридизации и ферментного анализа. Наборы рассчитаны на сто реакций.
3.3.10. Набор реагентов для пробоподготовки (бисер - 30 г,
лизирующий реагент - 60 куб. см (2 флакона), сорбент - 2 куб. см (2
пробирки), солевой буфер (10-кратный) - 10 куб. см, экстракционный
раствор - 10 куб. см) ТУ 2643-003-71321417-2004. Порядок приготовления
рабочего раствора солевого буфера описан в 4.1. Остальные реагенты
готовы к использованию.
3.3.11. Набор реагентов для амПЦР ТУ 2643-003-71321417-2004
(включает в себя: сухие смеси реагентов (100 пробирок, каждая пробирка
содержит Taq ДНК полимеразу, дезоксинуклеозидтрифосфаты и хлорид
магния с конечными концентрациями, соответственно, 1 ед., 200 мкМ и
2,5 мМ, а также оптимизированную буферную систему для проведения одной
стандартной ПЦР); растворитель; минеральное масло; "+" контроль
амплификации - 1 пробирка, 0,5 куб. см, праймеры на 35S-промотор
вируса мозаики цветной капусты:
- 35S_п 5` CGG СТА СТС CAA GAA TAT CAA AGA TAC AGT ТТС AGA AGA
(39 н.о.);
- 35S_o* 5` CCA TTT TCC TTT TTT ATT GTC CTT TCG ATG AAG TGA CAG A
(40 н.о.);
праймеры на маркерный ген gus из бактерии Escherichia coli:
- gus_ 5` АСС GTA ССТ CGC АТТ АСС СТТ ACG CTG AAG AGA (33 н.о.);
- gus_o* 5` TGC CCG СТТ CGA AAC CAA TGC СТА AAG AGA (30 н.о.);
праймеры на терминатор nos из агробактерии Agrobacterium
tumefaciens:
- nos_п 5` GGA CAA GCC GTT TTA CGT TTG GAA CTG АСА GA (32 н.о.);
- nos_o* 5` GCC TGA CGT ATG TGC TTA GCT CAT TAA ACT CCA GA (35
н.о.);
праймеры на маркерный ген nptII из транспазона Тn5 бактериального
происхождения:
- npt_п 5` GTG АСС CAT GGC GAT GCC TGC TTG С (25 н.о.);
- npt_o* 5` АСС CAG CCG GCC АСА GTC GAT GAA TCC AGA (30 н.о.);
праймеры на промотор ocs из агробактерии Agrobacterium
tumefaciens:
- ocs_п 5` AAA AAG TGG CAG AAC CGG TCA AAC СТА ААА GA (32 н.о.);
- ocs_o* 5` CGT TAT TAG TTC GCC GCT CGG TGT GTC GTA GA (32 н.о.).
Праймеры расфасованы в 10 пробирках по 0,5 куб. см.
Примечание: 35S_п; gus_п; nos_п; nptII_п; ocs_п - обозначают
прямые праймеры; 35S_o*; gus_o*; nos_o; nptII_o*; ocs_o* - обозначают
обратные праймеры, меченные биотином; н.о. - нуклеотидные остатки.
3.3.12. Набор реагентов для ДНК гибридизации и ферментного
анализа ТУ 2643-003-71321417-2004: 20xSSC - 50 куб. см;
диаминобензидин (ДАБ) - 100 таблеток; коньюгат пероксидазы хрена со
стрептавидином - 0,1 куб. см с концентрацией 1 мг/куб. см, 1 пробирка.
Примечание: Срок годности набора реагентов - 12 месяцев со дня
изготовления. Основную часть реагентов, упакованную в картонную
коробку, хранят в сухом темном месте при температуре от +2 град.С до
+8 град.С. В отдельных пластиковых пакетах при температуре -20 град.С
хранят праймеры, положительный контроль и конъюгат стрептавидин -
пероксидазы.
|
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ (ГМО) РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧ".