ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУ 2.3.2.1830-04. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 09.01.04 МУ 2.3.2.1830-04

5.1. ПЦР-идентификация чужеродного
                генетического материала в штаммах ГММ
     
     Согласно рекомендациям ФАО/ВОЗ стратегия  выявления  генетических
модификаций  у  микроорганизмов,  используемых  в производстве пищевых
продуктов,  должна  быть   направлена   на   выявление   максимального
количества   потенциальных  рисков.  Поэтому  экспертные  исследования
штаммов ГММ должны включать,  с одной стороны,  подтверждение  природы
штамма-реципиента   и   целевой   вставки   чужеродной  ДНК  (согласно
представленной заявителем документации),  а с другой стороны, выявлять
наличие   возможных   генетических   модификаций,   не   указанных   в
документации.   Рекомендуемые   стратегии    выявления    генетических
модификаций  предлагают  использовать  для  этих  целей наиболее часто
употребляемые векторные  последовательности:  селективные  гены  (гены
антибиотикорезистентности,  бактериоцинов или ауксотрофные селективные
маркеры), неэкспрессируемые последовательности (полилинкеры, промоторы
или  терминаторы),  а  также последовательности мигрирующих элементов.
Обнаружение  таких  последовательностей  будет   свидетельствовать   о
возможных   незадокументированных   генетических   модификациях,   что
потребует проведения дополнительных исследований штаммов ГММ.  С точки
зрения   безопасности   пищевые   ГММ   не   должны   содержать   гены
антибиотикорезистентности,  встроенная  ДНК   не   должна   кодировать
выработку  потенциально  опасных веществ,  а векторы класса food-grade
должны быть сконструированы таким образом,  чтобы  свести  к  минимуму
вероятность    передачи    нового   генетического   материала   другим
микроорганизмам.   Проведение   дополнительных   исследований    может
потребовать   использования   таких   методов,   как   различные  виды
гибридизационного и рестрикционного  анализа,  секвенирование,  анализ
функционирования вставки (ОТ-ПЦР и изучение продукции белка чужеродной
ДНК).  Однако  основным  скрининговым  методом  является  полимеразная
цепная  реакция  -  ПЦР.  Специально  подобранные пары праймеров будут
использованы   как   для   проверки   целевого   гена,   так   и   для
последовательностей,   свидетельствующих   о   возможных  генетических
модификациях.
     В настоящее  время  методы  молекулярной биологии,  основанные на
ПЦР-анализе,  находят все более широкое применение в целях диагностики
и    экспресс-анализа    разнообразного    биологического   материала.
Преимущество подобных методик обусловлено высокой чувствительностью  и
специфичностью   ПЦР,  совместимостью  ПЦР-анализа  с  дополнительными
методами    исследования     (секвенирование,     рестрикционный     и
гибридизационный   анализы   амплифицированных   фрагментов,  изучение
информационных РНК (ОТ-ПЦР) и транслируемого ими белкового  продукта).
Достоинством  ПЦР-анализа  являются  также  высокая  воспроизводимость
результатов,  технологичность  проведения  анализа   в   сочетании   с
доступностью  и  сравнительно  невысокой  стоимостью  оборудования для
организации ПЦР-лабораторий.