МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 15.01.02 МУ 4.2.1097-02

7.2. Реактивы
     
     а) Для определения образования индола
     Реактив Эрлиха:
     Парадиметиламинобензальдегид - 1,0 г
     Этиловый спирт - 95,0 мл
     Концентрированная соляная кислота - 20,0 мл.
     Альдегид растворяют в спирте, затем добавляют кислоту, смешивают,
хранят в темном месте.
     Полоски фильтрованной  бумаги  пропитывают  насыщенным  раствором
щавелевой кислоты и высушивают в термостате.
     б) Для выявления образования сероводорода
     Полоски фильтровальной      бумаги      пропитывают     раствором
уксусно-кислого свинца. Подсушивают на воздухе.
     Полоски индикаторных  бумажек на индол и сероводород помещают под
пробку пробирки с засеянной культурой.  В  случае  образования  индола
полоска краснеет, а при образовании сероводорода полоска чернеет.
     в) Для определения нитратредуктазы:
     Готовят отдельно  два  раствора.  Первый  - путем растворения при
нагревании в фарфоровой ступке в 20 мл дистиллированной  воды  0,2  мг
альфа-нафтиламина  (C10H7NH2).  Жидкость  осторожно  вливают  в 150 мл
12-процентного раствора уксусной кислоты. Второй - 0,5 г сульфаниловой
кислоты  (C6H4NH2SO3H)  растворяют  в  150  мл  12-процентной уксусной
кислоты.
     Затем оба  раствора  сливают  в темную склянку с хорошо притертой
пробкой.  Реактив Грисса должен быть бесцветным,  если он розовеет, то
им не пользуются.
     Сложность приготовления   реактива   Грисса,    дефицитность    и
токсичность    входящих    в    него    компонентов    (в   частности,
альфа-нафтиламина)  ограничивают  возможности  его  применения.   Этих
недостатков   лишен  метод  с  использованием  риванолового  реактива,
представляющего собой смесь равных  объемов  0,1-процентного  раствора
риванола  в  дистиллированной  воде  и 12-процентного раствора соляной
кислоты.  В случае положительной реакции культура испытуемого  штамма,
выращенная  в  бульоне  или  1-процентной пептонной воде с 0,1%  KNO3,
окрашивается в красный цвет.
     г) Для определения бета-галактозидазной активности приготавливают
М/75 раствор орто-нитрафенил-бета-Д-галактопиранозида (ОНФГ):
     ОНФГ - 80 мг
     Дистиллированная вода - 75 мл
     Фосфатный буфер - 5 мл.
     ОНФГ растворяют  в  дистиллированной  воде  при  37   ёC,   затем
добавляют  раствор  однозамещенного фосфорно-кислого натрия (NaH2PO4 х
H2O).  рН доводят до 7,0.  Раствор должен быть бесцветным,  хранят при
температуре  4 ёC.  Перед использованием раствор выдерживают в течение
нескольких  минут  до   растворения   фосфата,   который   на   холоде
кристаллизируется.