Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".
5.2. Порядок исследования
При бактериологическом исследовании на холеру используют
различные питательные среды: жидкие среды обогащения, щелочной агар,
элективные дифференциально-диагностические среды и набор сред для
идентификации.
Применяют сухие среды производственного выпуска, имеющие номера
госрегистрации и лицензии, или среды, консерванты, приготовленные по
рецептуре и технологии, изложенной в разделе 7. Перечень
производственных питательных сред и диагностических препаратов для
выделения и идентификации возбудителя холеры приведен в Приложении 5.
При транспортировании и хранении медицинских иммунобиологических
препаратов следует руководствоваться СП 3.3.2.028-95. Используемые для
диагностики холеры питательные среды подлежат бактериологическому
контролю в установленном порядке.
Агаровые среды перед использованием должны быть тщательно
подсушены. Посев делают так, чтобы получить рост в виде изолированных
колоний. Все посевы инкубируют при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC.
Посевы исследуемого материала на всех этапах выращивают в
1-процентной пептонной воде 6 - 8 ч, в пептонной воде с теллуритом
калия - 12 - 18 ч, на щелочном агаре - не менее 14 - 16 ч, а на
плотных элективных средах - 18 - 24 ч. Теллурит калия следует
добавлять в 1-процентную пептонную воду с рН не ниже 8,3 +/- 0,1, до
внесения исследуемого материала. Продолжительность хранения рабочего
раствора теллурита калия (1:1000) - 7 дней, а питательных сред с
теллуритом калия - не более 2 суток при условии содержания их в
холодильнике.
5.2.1. Исследование проб от больных и вибриононосителей,
секционного материала (рис. 1).
------------------------------------------------------------------
| Исследуемый материал |
------------------------------------------------------------------
| | |
| | |
\/ \/ \/
-------- ----------------------------->---------------------
|ЩА, ЭС| | I | ------ |Ускоренные методы: |
-------- ------------>| II |---------->|- МФА |
| | ------ |- РИВ |
| \/ | |- РНГА |
| -------- \/ |- ПЦР |
| |ЩА, ЭС| ------ ---------------------
| -------- | ЩА |
| | ------
| | |
\/ \/ \/
---------------------------------------
|- отбор колоний |
|- высев подозрительных колоний на ЩА |
|и ПУС |
---------------------------------------
|
\/
----------------------------
|Отбор культур по ПУС и ОП |
----------------------------
|
\/
-------------------------------------------------------------
| | | | | |
\/ \/ \/ \/ \/ \/
------ ------- ------- ------ ------ ------
|ПУС+| |ПУС+*| |ОП+* | |ПУС-| |ПУС-| |ПУС+|
|ОП+ | ------- ------- |ОП+ | |ОП- | |ОП- |
------ ------ ------ ------
| | | |
----------------------------------- \/ \/
| ----------- -----------
\/ |Не | |Исследуют|
------------------------------- |исследуют| |на |
---| ОРА с сыворотками O1 и O139 |---------¬ ----------- |кишечную |
|+ ------------------------------- - | |группу |
| | -----------
| |
| |
\/ \/
--------------------------------------- ------------------------
|Сокращенная схема идентификации: | |Определение |
|- морфология и подвижность микробных | |принадлежности к роду |
|клеток | |Vibrio, виду |
|- ОП | |V. cholerae или другим|
|- O/F тест и отношение к отдельным | |видам патогенных |
|углеводам (табл. 4) | |вибрионов |
|- МФА | ------------------------
|- РИВ | ------------------------
|- РА с сыворотками O1, Инаба, Огава, | |Условные обозначения: |
|РО или слайд-агглютинация с O139 | |I и II - среда |
|- чувствительность к фагам холерным | |накопления; ЩА - |
|классическому и эльтор | |щелочной агар; ЭС - |
|Дополнительные признаки биовара | |элективная среда для |
|V. cholerae: | |выделения холерных |
|- гемагглютинация | |вибрионов; ПУС - |
|- чувствительность к полимиксину В | |полиуглеводная среда; |
|50 ед./мл | |ОП - оксидазная проба;|
|- реакция Фогес - Проскауэра | |ОРА - ориентировочная |
|Определение антибиотикограммы | |реакция агглютинации; |
|Оценка эпидемической значимости: | |РА - развернутая |
|- гемолитическая активность по Грейгу| |реакция агглютинации; |
|- чувствительность к фагам холерным | |МФА - метод |
|эльтор ctх+ и ctx- | |флюоресцирующих |
|- ПЦР, ДНК-зондирование | |антител; РИВ - реакция|
|- токсигенность на кроликах-сосунках | |иммобилизации |
|Уточнение родовой и видовой | |вибрионов; РНГА - |
|принадлежности атипичных культур по | |реакция непрямой |
|расширенному набору признаков | |гемагглютинации; ПЦР -|
|(табл. 2, 3) | |полимеразная цепная |
--------------------------------------- |реакция; |
|* - в случае отбора |
|колоний только на ПУС |
|или ЩА. |
------------------------
Рис. 1. Схема лабораторного исследования на холеру
I этап
Испражнения, рвотные массы больных, а также содержимое кишечника,
желчного пузыря и суспензию кусочков слизистой тонкого кишечника трупа
в объеме 0,5 - 1,0 мл засевают пипеткой в 50 - 100 мл накопительной
среды, петлей - на щелочной агар и одну из элективных сред (СЭДХ,
TCBS).
При исследовании материала от больных с подозрением на
заболевание холерой не допускается использование 1-процентной
пептонной воды с теллуритом калия в качестве накопительной среды.
В случае поступления материала от больных с подозрением на холеру
целесообразно применять ускоренные методы исследования:
иммунолюминесцентный, иммобилизацию и ПЦР со специфическими праймерами
(см. раздел 6).
Материал от подозреваемых на вибриононосительство засевают в 50
мл среды накопления при индивидуальных анализах и в 100 мл - при
групповых, объединяя в один флакон по 0,5 - 1,0 мл пробы не более чем
от 5 человек. К групповым посевам прибегают в редких случаях при
проведении массовых обследований на вибриононосительство.
Материал, доставленный в 5 мл 1-процентной пептонной воды,
полностью используют для посева в 50 мл среды накопления. В случае
поступления в лабораторию материала, забранного в 50 мл 1-процентной
пептонной воды во флаконе, и доставки его не позже 2 ч после забора
пробы флакон помещают в термостат на 6 ч для накопления возбудителя.
При доставке материала в более поздние сроки 5 мл его засевают в 50 мл
1-процентной пептонной воды.
В отдельных случаях, при бактериологическом исследовании
материала от лиц, принимавших антибиотики, активные по отношению к
возбудителю холеры, его засевают в 200 - 300 мл 1-процентной пептонной
воды (предпочтительно в широкогорлые колбы) и на 2 чашки щелочного
агара так, чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Посевы
инкубируют при 37 ёC в течение 24 ч, производя последовательные высевы
через 8 - 10 ч инкубации с поверхностного слоя среды на пластинки
щелочного агара. Использование второй среды обогащения в этом варианте
исследования нецелесообразно.
II этап (через 6 - 8 ч от начала исследования)
С первой среды накопления делают высев на щелочной агар и одну из
элективных сред и в 5 - 8 мл второй среды накопления. Пересевы в
жидкие и на плотные среды делают с поверхности жидкой среды большой
бактериологической петлей диаметром 5 мм.
При отрицательных результатах исследования нативного материала
ускоренными методами их повторяют после 6 ч инкубации первой среды
накопления.
III этап (через 12 - 16 ч от начала исследования)
Высев со второй среды накопления на щелочной агар.
В случае необходимости ускорения хода анализа материала от
больного или подозрительного на заболевание холерой отбор колоний со
щелочного агара, засеянного в начале исследования, можно начинать уже
на этом этапе, в остальных случаях - на следующем.
IV этап (через 18 - 24 ч от начала исследования)
Отбор подозрительных на холерный вибрион колоний в посевах на
плотные среды нативного материала, а также в высевах из 1-й и 2-й
накопительных сред.
Чашки с посевами просматривают в проходящем свете невооруженным
глазом или с помощью лупы, а также (особенно в вечернее и ночное
время) под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете и
отбирают подозрительные на вибрионы колонии для выделения и
идентификации культуры.
На щелочном агаре колонии холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп
в типичной S-форме - круглые, гладкие, плоские, голубоватые,
гомогенные, с ровными краями, прозрачные в проходящем свете и
светло-серые с голубым или зеленоватым оттенком под стереоскопическим
микроскопом в косо проходящем свете (Приложение 6).
Колонии холерных вибрионов на элективных средах TCBS и СЭДХ имеют
ярко-желтую окраску на зеленом или синем фоне среды, полупрозрачные.
Размеры колоний на щелочном агаре через 10 - 12 ч инкубации обычно не
превышают 1 мм, а к 18 - 24 ч достигают 2 - 3 мм в диаметре. Темпы
формирования колоний холерных вибрионов на элективных средах несколько
замедлены, поэтому просмотр посевов на СЭДХ или TCBS следует проводить
не ранее чем через 18 - 20 ч инкубации, когда размеры их становятся
близки к колониям, вырастающим на щелочном агаре.
В отдельных случаях в посевах могут также встречаться атипичные
колонии: мутные с плотным центром, пигментированные (коричневые или
светло-желтые), мельчайшие коккоподобные, шероховатые.
Следует иметь в виду, что состав и качество питательных сред
оказывают влияние на величину и плотность колоний холерных вибрионов,
а также на морфологию клеток.
При отборе колоний можно использовать пробу на индофенолоксидазу
с однокомпонентным реактивом (без альфа-нафтола) или с индикаторными
бумажками из набора СИБ-1 для идентификации вибрионов. С колониями,
обнаруженными на элективных средах, пробу на оксидазу ставить не
рекомендуется.
Подозрительные колонии проверяют в слайд-агглютинации с
сывороткой холерной O1 в разведении 1:50 - 1:100. При положительной
реакции и достаточном количестве подозрительных колоний ставят
слайд-агглютинацию с варианто-специфическими сыворотками Инаба и Огава
в том же разведении, приготавливают мазки для окраски по Граму и
обработки флюоресцирующими иммуноглобулинами. При отрицательных
результатах колонии, обнаруженные в посевах материала от больных,
проверяют в слайд-агглютинации с холерными сыворотками O139 и РО.
Положительная ориентировочная реакция агглютинации с холерной O1
сывороткой в разведении 1:100 и варианто-специфической в разведении
1:50 или положительная реакция с флюоресцирующими иммуноглобулинами в
сочетании с морфологическими, культуральными признаками и
специфической иммобилизацией позволяют выдать на соответствующем этапе
предварительный ответ об обнаружении в исследуемом материале холерного
вибриона O1, а в случае положительной реакции с сывороткой O139 -
холерного вибриона O139 серогруппы.
Подозрительные на вибрионы колонии, агглютинирующиеся и не
агглютинирующиеся холерными O1 и O139 сыворотками, отсевают на одну из
полиуглеводных сред (лактозосахарозная, Ресселя, Клиглера,
маннозосахарозная или др.) и (или) на сектор пластинки щелочного агара
для выделения чистой культуры, ее идентификации и определения
чувствительности к антибиотикам.
V этап (через 24 - 36 ч от начала исследования)
Отбор культур для идентификации.
На полиуглеводных средах отбирают культуры с типичными для
вибрионов характером роста и изменениями:
- на двууглеводных средах (лактозосахарозная, глюкозолактозная и
Клиглер) наблюдается характерное для кислой реакции изменение цвета
столбика при сохранении цвета скошенной части без образования газа, а
также сероводорода, улавливаемого в среде Клиглера;
- в маннозосахарозной среде за счет ферментации обоих углеводов
окрашиваются и столбик, и скошенная часть, а также улавливается
образование сероводорода.
Культуры, выросшие на щелочном агаре, проверяют на наличие
индофенолоксидазы.
Определяют морфологию микроорганизмов и чистоту отобранных
культур, выросших на щелочном агаре и полиуглеводных средах, с помощью
окрашенных по Граму мазков.
Культуры, дающие характерные изменения на полиуглеводных средах и
положительные в пробе на оксидазу, проверяют в ориентировочной
слайд-агглютинации с холерными сыворотками O1 в разведении 1:100, РО,
Инаба и Огава - в разведении 1:50. При отрицательных результатах с
этими сыворотками ставят слайд-агглютинацию с холерной сывороткой O139
серогруппы, используя ее в соответствии с инструкцией по применению.
На основании положительных результатов агглютинации с сыворотками
O1, Инаба или/и Огава выдают предварительный положительный ответ о
выделении из исследуемого материала культуры холерного вибриона O1
соответствующего серовара.
Если выделенная культура реагирует с холерной сывороткой O139 при
отрицательных результатах с сыворотками O1 серогруппы, выдают ответ о
выделении холерного вибриона O139 серогруппы.
Проводят идентификацию выделенных на полиуглеводных средах или на
щелочном агаре агглютинирующихся и не агглютинирующихся сыворотками
O1, РО или O139 серогрупп оксидазопозитивных культур по сокращенной
или полной схеме.
VI этап (через 36 - 48 ч от начала исследования)
Учитывают результаты идентификации и выдают окончательный ответ о
выделении культуры холерного вибриона соответствующей серогруппы и
биовара.
Для холерных вибрионов O1 эпидемическую значимость оценивают по
тестам гемолитической активности и чувствительности к фагам эльтор
ctx+ и ctx-, а в специализированных учреждениях - по результатам ПЦР
или генетического зондирования на присутствие в геноме выделенной
культуры ctx AB гена, а также токсигенности на модели
кроликов-сосунков. Эпидемическую значимость холерных вибрионов O139
серогруппы определяют по тем же тестам, кроме чувствительности к фагам
эльтор ctx+ и ctx-. К окончанию этого этапа исследования должна быть
определена антибиотикочувствительность выделенной культуры.
При выделении от больного или вибриононосителя культуры холерного
вибриона, не агглютинирующейся холерными сыворотками O1 и O139, выдают
ответ о выделении холерных вибрионов не O1 и не O139. При наличии
вибрионных агглютинирующих диагностических сывороток определяют
принадлежность к другим серогруппам (О2 - О83).
Идентификацию культур, агглютинирующихся РО-сывороткой, см. в
разделе 5.3.
5.2.2. Исследование объектов окружающей среды.
Схема анализа объектов окружающей среды отличается от схемы
исследования материала от больных только на I этапе, II - VI этапы
изложены выше.
Вода поверхностных водоемов и водопроводная
В зависимости от времени доставки пробы возможны следующие
варианты посевов с целью первичного накопления вибрионов:
- к исследуемой воде добавляют раствор основного пептона до
1-процентной концентрации, определяют рН, в случае необходимости
подщелачивают 10-процентным раствором едкого натрия до рН 8,4 +/- 0,1.
Время инкубации в 1-й среде накопления - 8 - 10 ч. Объем 2 среды
накопления - 10 мл; время инкубации в среде без теллурита калия 6 ч, а
с теллуритом калия - 18 - 20 ч;
- в исследуемую воду добавляют раствор основного пептона до
1-процентной концентрации и теллурит калия из рабочего разведения
1:1000 до концентрации 1:100000 или 1:200000 в соответствии с данными
проверки. Устанавливают рН - 8,4 +/- 0,1. Время инкубации 18 - 24 ч;
вторая среда накопления - 10 мл среды без теллурита калия, время
инкубации 6 - 8 ч;
- исследование проб воды можно также проводить с использованием в
качестве ингибитора посторонней флоры моющего средства "Прогресс" в
концентрации 0,1 - 0,2%;
- после добавления основного раствора пептона до 1-процентной
концентрации и установления щелочной реакции пробы сохраняют при
комнатной температуре (не выше 25 ёC) до утра (первая среда
накопления). В начале следующего дня засевают 5 мл поверхностного слоя
в 100 мл 1-процентной пептонной воды (вторая среда накопления) и
делают высев на щелочной агар; высев со второй среды накопления
производят через 6 - 8 ч инкубации;
- воду фильтруют через мембранные фильтры N 2 или 3, смыв с
которых сеют в накопительную среду и на агаровые пластинки. Из смыва с
фильтра можно делать мазки для окраски флюоресцирующими холерными
иммуноглобулинами, а также ставить РНГА, ПЦР со специфическими
праймерами.
При интенсивном бактериальном загрязнении проб можно использовать
3 среду накопления.
Хозяйственно-бытовые сточные воды
Сточные воды, доставленные в объеме 1 л, фильтруют через бумажный
или матерчатый фильтр для освобождения от механических примесей (при
необходимости).
После добавления к пробам основного раствора пептона до
1-процентной концентрации устанавливают рН 8,4 +/- 0,1 и инкубируют в
объемах по 500 мл 8 - 10 ч (1 среда накопления) или с добавлением
теллурита калия 1:100000 (1:200000) - 18 - 24 ч.
При заборе сточных вод марлевыми тампонами последние помещают в
широкогорлые колбы или банки с накопительной средой (500 мл) и далее
исследуют, как указано выше.
Гидробионты
Лягушку непосредственно перед исследованием обездвиживают уколом
иглы в спинной мозг и фиксируют на препаровальной доске брюшком вверх.
Поверхность брюшка обрабатывают спиртом и ножницами делают медиальный
разрез. Желчный пузырь отсекают от печени, разрезают и делают
отпечаток на пластинке щелочного агара. Остатки желчи вместе с желчным
пузырем помещают во флаконы с 50 - 100 мл 1-процентной пептонной воды.
Содержимое желудка засевают в 1-процентную пептонную воду, а
внутренней поверхностью стенки делают отпечатки на агаровые пластинки.
Посев кишечника делают таким же образом, отсекая несколько петель в
верхнем, среднем и нижнем отделах кишечника.
У крупных рыб в том же порядке засевают в накопительную среду
содержимое желчного пузыря, желудка, кишечника и жабры. Мелких рыб
(мальков) измельчают ножницами по 10 - 20 экз. в одной пробе и делают
посев суспензии петлей на чашку с агаром и в 1-процентную пептонную
воду.
Дафний, циклопов и др. рачков растирают в ступке и засевают
петлей в 1-процентную пептонную воду.
У раков исследуют кишечник и жабры, делая посев содержимого в
среду накопления, и слизистой стенки - отпечатком на агаровую среду.
Пищевые продукты
Безалкогольные напитки исследуют тем же методом, что и воду.
Молоко в количестве 5 мл сеют в 50 - 100 мл среды накопления или
к 0,5 л молока добавляют основной раствор пептона до 1-процентной
концентрации его в молоке. Другие молочные продукты (кефир, сметану,
творог, мороженое и т.д.) в количестве 5 - 10 мл засевают в
1-процентную пептонную воду.
Твердые пищевые продукты измельчают, растирают в ступке с
физиологическим раствором и засевают в количестве 10 г в 100 мл
накопительной среды и петлей на агаровые среды.
Масло засевают в жидкую среду накопления в количестве 5 - 10 г,
размягчив его в термостате, или делают посев смыва с поверхности его
кусков.
После посева продукта устанавливают рН среды 8,4 +/- 0,1.
Смывы с объектов внешней среды и мух засевают в 1-процентную
пептонную воду и исследуют по обычной схеме.
5.2.3. Порядок исследования в условиях односменной работы
лаборатории.
При осуществлении эпиднадзора за холерой исследование материала
от обследуемых контингентов может выполняться в следующих вариантах.
В качестве 1-й или 2-й среды накопления используют 1-процентную
пептонную воду (рН 8,4 +/- 0,1) с теллуритом калия в конечной
концентрации 1:100000 - 1:200000 в соответствии с результатами его
контроля.
Вопрос выбора транспортной среды и порядка исследования решают в
зависимости от разницы времени с момента взятия пробы до поступления
ее в лабораторию. Примерная схема забора материала от больных в
1-процентную пептонную воду и порядок дальнейшего его исследования на
холеру с учетом различного времени доставки в лабораторию представлены
в табл. 1. В течение рабочей недели для отбора проб используют
1-процентную пептонную воду без теллурита калия в объеме 5 - 10 мл, во
флаконах или пробирках (транспортная среда).
Таблица 1
ПОРЯДОК ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВРЕМЕНИ
ОТБОРА И ДОСТАВКИ ЕГО В ЛАБОРАТОРИЮ В 1% ПВ
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------
|N |Время |Время |Среда |Назначение |1-я среда |2-я среда |Высев со |
|вариантов|взятия |доставки в |для |среды |накопления |накопления. |2-й среды |
| |материала |лабораторию|взятия | | |Высев с 1-й среды |накопления |
| | | |проб | | |накопления | |
|---------|------------|-----------|---------|-------------|-------------|---------------------|------------|
|1 |6.00 - |До 10.00 |а) 1% ПВ |Среда |Среда с |Через 6 ч инкубации |В начале |
| |10.00 | |50 мл |накопления |доставленны |пересев в 1% ПВ с |следующего |
| | | |б) 1% ПВ | |м |ТК |рабочего |
| | | |5 - 10 |Транспортная |материалом |и высев на щелочной |дня |
| | | |мл |среда |Посев в |агар и (или) ЭС | |
| | | | | |50 мл 1% ПВ | | |
|---------|------------|-----------|---------|-------------|-------------|---------------------|------------|
|2 |10.00 - |После |1% ПВ |Транспортная |Посев 5 - |9.00 следующего дня |Через 6 |
| |до конца |10.00 |5 - 10 |среда |10 |пересев в 1% ПВ, |часов |
| |рабочего |в течение |мл | |мл среды с |высев на щелочной |инкубации |
| |дня |рабочего | | |материалом |агар и (или) ЭС | |
| |лаборатории |дня | | |в | | |
| | |лаборатори | | |50 мл 1% ПВ | | |
| | |и | | |с ТК | | |
|---------|------------|-----------|---------|-------------|-------------|---------------------|------------|
|3 |По |До 10.00 |1% ПВ |Транспортная |Посев 5 - |Через 6 ч инкубации |В начале |
| |окончании |следующего |5 - 10 |среда |10 |пересев в 1% ПВ с |следующего |
| |рабочего |дня |мл | |мл среды с |ТК, |рабочего |
| |дня | | | |материалом |высев на щелочной |дня |
| |лаборатории | | | |в |агар и (или) ЭС | |
| | | | | |50 мл 1% ПВ | | |
|---------|------------|-----------|---------|-------------|-------------|---------------------|------------|
|4 |Выходные |До 10.00 |1% ПВ с |Транспортная |Посев 5 - |Через 6 ч инкубации |В начале |
| |дни |рабочего |ТК 50 мл |среда |10 |пересев в 1% ПВ с |следующего |
| |лаборатории |дня | | |мл среды с |ТК, |рабочего |
| | | | | |материалом |высев на щелочной |дня |
| | | | | |в 50 мл 1% |агар и (или) ЭС | |
| | | | | |ПВ | | |
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Обозначения: ТК - теллурит калия; ПВ - пептонная вода;
ЭС - элективная среда для выделения холерного вибриона
Пробы до отправки в лабораторию сохраняют при комнатной
температуре (24,0 +/- 1,0) ёC в биксах, ящике, шкафу и т.д. в
специально выделенной комнате, закрывающейся на замок.
Продолжительность сохранения проб в указанных условиях - до 24 ч.
В случаях, когда температура в помещении превышает 25 ёC,
материал следует брать в 1-процентную пептонную воду с теллуритом
калия.
В лаборатории в пробы во флаконах доливают соответствующую среду
накопления в количестве до 50 мл, а из пробирок все 5 - 10 мл
транспортной среды с материалом переносят пипеткой в 50 мл среды
накопления.
На период выходного дня лаборатории в порядке исключения
допускается следующий вариант: забор материала в 50 мл 1-процентной
пептонной воды с теллуритом калия (транспортная среда); допускаемое
время сохранения проб до начала исследования при температуре (20,0 +/-
1,0) ёC - 60 ч, (27,0 +/- 3,0) ёC - 48 ч. В лаборатории 5 - 10 мл
поверхностного слоя среды с материалом переносят в 50 мл 1-процентной
пептонной воды без теллурита калия (1 среда накопления) и делают высев
на чашку щелочного агара с дальнейшим исследованием по изложенной
схеме.
Пептонную воду повышенной щелочности в качестве накопительной
среды рекомендуется использовать только на первом этапе исследования с
удлинением срока инкубации ее до 18 - 24 ч. Основной раствор пептона и
1-процентную пептонную воду с рН 9,5 +/- 0,5 можно готовить впрок по
общепринятой методике с подщелачиванием до необходимого уровня и
последующей стерилизацией при температуре 120 ёC - 20 мин.
Для подщелачивания пептонной воды используют 10 - 20% NaOH.
|
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".